標(biāo)準(zhǔn)曲線需要幾個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),是由所檢測組分的濃度范圍、分析儀響應(yīng)特性、干擾因素、濃度與檢測信號響應(yīng)類型有關(guān)的。
3個(gè)點(diǎn):對于一些低濃度,特別是微量分析,并且濃度范圍不是很大的,檢測器響應(yīng)可靠,背景干擾非常小的,則可以選用較少的工作點(diǎn)就行,一般有3個(gè)濃度點(diǎn)就足夠了,有些甚至可以只用一個(gè)濃度點(diǎn)就行,另一個(gè)點(diǎn)直接用坐標(biāo)原點(diǎn)。
4~6個(gè)點(diǎn):對于平時(shí)測量的樣品濃度范圍較寬,并且檢測器響應(yīng)不完全是一次曲線(直線)的,可以采用二次曲線或分段校正方式,以減少數(shù)據(jù)偏差,這種情況就需要多用幾個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),如果不分段,數(shù)據(jù)點(diǎn)有4~6個(gè)就夠用。
至少兩個(gè)點(diǎn):但如果是分段校正,則每段需要至少兩個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。而對于一些樣品無濃度范圍規(guī)律的,特別是一些檢測機(jī)構(gòu),如果分析儀的檢測響應(yīng)可靠,環(huán)境因素影響少的,可以做校正曲線。若是環(huán)境因素影響大的,則不必做校正曲線,而采用標(biāo)準(zhǔn)加入法或標(biāo)準(zhǔn)加入-一次稀釋法反而簡便一些。
實(shí)際上,我們一般是做五個(gè)點(diǎn)(不包括零濃度);一般以檢出限的5~10倍為第一個(gè)點(diǎn),以后根據(jù)1倍遞增,最高濃度是最低濃度的10~20倍為宜(理化分析實(shí)驗(yàn)為例)。當(dāng)然,要根據(jù)儀器的靈敏度來調(diào)整。
2參考依據(jù)
GB/T22554-2010《基于標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性校準(zhǔn)》中:
(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)覆蓋正常操作條件下的被測量范圍;
(2)標(biāo)準(zhǔn)樣品的組分盡量與被測樣品組分一致;
(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度值應(yīng)等距離的分布在被測量范圍;
(4)標(biāo)準(zhǔn)樣品的個(gè)數(shù)至少應(yīng)有3個(gè)濃度;
(5)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)至少重復(fù)2次,這個(gè)重復(fù)是指從稀釋開始;
如果國家標(biāo)準(zhǔn)有相應(yīng)的濃度系列推薦,盡量按國家標(biāo)準(zhǔn)。工作中我們經(jīng)常采用線性校準(zhǔn),因?yàn)榫性方程最為簡潔。
校準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)
1線性檢驗(yàn)
相關(guān)系數(shù)r≥0.999,某些實(shí)驗(yàn)0.995即滿足要求,甚至可以0.99
2斜率的檢驗(yàn)
在不同時(shí)間,制作同一條曲線,確定校準(zhǔn)曲線是否穩(wěn)定。(連續(xù)7天,每天做一條校準(zhǔn)曲線,得到7條校準(zhǔn)曲線)用斜率相對偏差檢驗(yàn):
一般而言,分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%;
原子吸收分光光度法要求其相對差值小于10%;
3截距檢驗(yàn)(過零點(diǎn)檢驗(yàn))
理想的回歸曲線,截距a=0,曲線通過原點(diǎn),由于存在難以控制的隨機(jī)因素,多數(shù)曲線表現(xiàn)為a≠0,不通過原點(diǎn),遇此情況要檢驗(yàn)其是否通過原點(diǎn)。
將截距a與0做t檢驗(yàn),當(dāng)取95%置信水平時(shí),經(jīng)檢驗(yàn)無顯著性差異,表示截距檢驗(yàn)合格,說明校準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確度高。
將截距a與0做t檢驗(yàn),當(dāng)取95%置信水平時(shí),看有無顯著性差異
校準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)
01線性檢驗(yàn)
相關(guān)系數(shù)r≥0.999,某些實(shí)驗(yàn)0.995即滿足要求,甚至可以0.99。
02斜率檢驗(yàn)
在不同時(shí)間,制作同一條曲線,確定校準(zhǔn)曲線是否穩(wěn)定。(連續(xù)7天,每天做一條校準(zhǔn)曲線,得到7條校準(zhǔn)曲線)用斜率相對偏差檢驗(yàn):
一般而言,分子吸收分光光度法要求其相對差值小于5%;
原子吸收分光光度法要求其相對差值小于10%。
03截距檢驗(yàn)(過零點(diǎn)檢驗(yàn))
理想的回歸曲線,截距a=0,曲線通過原點(diǎn),由于存在難以控制的隨機(jī)因素,多數(shù)曲線表現(xiàn)為a≠0,不通過原點(diǎn),遇此情況要檢驗(yàn)其是否通過原點(diǎn)。
將截距a與0做t檢驗(yàn),當(dāng)取95%置信水平時(shí),經(jīng)檢驗(yàn)無顯著性差異,表示截距檢驗(yàn)合格,說明校準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確度高。
將截距a與0做t檢驗(yàn),當(dāng)取95%置信水平時(shí),看有無顯著性差異。