空氣、食品接觸面——采樣與檢測(cè)方法
發(fā)布日期:2022-06-09
核心提示:目的檢測(cè)生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo),生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控,達(dá)到規(guī)定
檢測(cè)生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機(jī)械設(shè)備的微生物指標(biāo),生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當(dāng)中病原微生物的監(jiān)控,達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn),以控制食品成品的質(zhì)量。
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB 15979-2002、《HACCP原理與實(shí)施》、中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《公共場(chǎng)所空氣微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定》GB/T 18204.1-2013、出入境檢驗(yàn)檢疫局2004年《出入食品微生物檢驗(yàn)培訓(xùn)教材》中《出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細(xì)菌檢驗(yàn)方法》、日本東京冷凍食品檢驗(yàn)方法。
①車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí),在加工前進(jìn)行采樣,以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。②全廠統(tǒng)一放長假后,車間生產(chǎn)前,進(jìn)行采樣。③產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí),應(yīng)及時(shí)對(duì)車間進(jìn)行采樣,如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn),整改后再進(jìn)行采樣檢驗(yàn)。④實(shí)驗(yàn)性新產(chǎn)品,按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗(yàn)。⑤正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣,每周一次。在動(dòng)態(tài)下進(jìn)行,室內(nèi)面積不超過30m2,在對(duì)角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn),里、外點(diǎn)位置距墻1m;室內(nèi)面積超過30m2,設(shè)東、西、南、北、中五點(diǎn),周圍4點(diǎn)距墻1m。采樣時(shí),將含平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9cm)置采樣點(diǎn)(約桌面高度),并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處,打開平皿蓋,使平板在空氣中暴露5min。采樣后必須盡快對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè),送檢時(shí)間不得超過4h,若樣品保存于0~4℃條件時(shí),送檢時(shí)間不得超過24h。①在采樣前將準(zhǔn)備好的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置36℃±1℃培養(yǎng)24h,取出檢查有無污染,將污染培養(yǎng)基剔除。②將已采集樣品的培養(yǎng)基在4h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室,菌落總數(shù)于36℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果,計(jì)數(shù)平板上細(xì)菌菌落數(shù)。①記錄平均菌落數(shù),用“CFU/皿”來報(bào)告結(jié)果。用肉眼直接計(jì)數(shù),標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì),然后用5~10倍放大鏡檢查,不可遺漏。②若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊,可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。2、工作臺(tái)(機(jī)械器具)表面與工人手表面采樣與測(cè)試方法:a.車間轉(zhuǎn)換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時(shí),在加工前進(jìn)行擦拭檢驗(yàn),以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。b.全廠統(tǒng)一放長假后,車間生產(chǎn)前,進(jìn)行全面擦拭檢驗(yàn)。c.產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果超內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)時(shí),應(yīng)及時(shí)對(duì)車間可疑處進(jìn)行擦拭,如有檢驗(yàn)不合格點(diǎn),整改后再進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。d.實(shí)驗(yàn)新產(chǎn)品,按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗(yàn)。e.對(duì)工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時(shí),進(jìn)行擦拭檢驗(yàn)。f.正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭,每周一次。a.工作臺(tái)(機(jī)械器具):用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面(取與食品直接接觸或有一定影響的表面)取25cm2的面積,在其內(nèi)涂抹10次,然后剪去手接觸部分棉棒,將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。b.工人手:被檢人五指并攏,用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面,從指尖到指端來回涂擦10次,然后剪去手接觸部分棉棒,將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。擦拭時(shí)棉簽要隨時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng),保證擦拭的準(zhǔn)確性。對(duì)每個(gè)擦拭點(diǎn)應(yīng)詳細(xì)記錄所在分場(chǎng)的具體位置、擦拭時(shí)間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時(shí)間。(2)細(xì)菌·大腸菌群的檢測(cè)培養(yǎng):樣液稀釋:將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1:10稀釋液。如污染嚴(yán)重,可十倍遞增稀釋,吸取1mL 1:10樣液加9mL無菌生理鹽水中,混勻,此液為1:100稀釋液。a.以無菌操作,選擇1~2個(gè)稀釋度各取1mL樣液分別注入到無菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿(平行樣),將已融化冷至45℃左右的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿,每皿約15~20mL,充分混合。b.待瓊脂凝固后,將平皿翻轉(zhuǎn),置36℃±1℃培養(yǎng)48h后計(jì)數(shù)。c.結(jié)果報(bào)告:報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù) 。a.以無菌操作,選擇1~2個(gè)稀釋度各取1mL樣液分別注入到無菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿(平行樣),將VRBA培養(yǎng)基傾入平皿,每皿約15~20mL,充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基,約3-5mL。b.待瓊脂凝固后,將平皿翻轉(zhuǎn),置36℃±1℃培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)。c.證實(shí)實(shí)驗(yàn):從VRBA平板上挑取典型和可疑菌落接種BGLB進(jìn)行證實(shí)實(shí)驗(yàn)。d.結(jié)果計(jì)算:經(jīng)最后證實(shí)為大腸菌群陽性的試管比例乘以平板上出現(xiàn)的典型和可疑菌落個(gè)數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。e.結(jié)果報(bào)告:報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)。a.以無菌操作,選擇3個(gè)稀釋度各取1mL樣液分別接種到LST肉湯培養(yǎng)基中,每個(gè)稀釋度接種三管。b.置LST肉湯管于36℃±1℃培養(yǎng)48±2h。記錄所有LST肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。c.選擇產(chǎn)氣渾濁的發(fā)酵管接種BGLB進(jìn)行復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。d.結(jié)果報(bào)告:按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù),查MPN表報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。a.取1mL稀釋液注入滅菌的平皿內(nèi),傾注15-20mL的B-P培養(yǎng)基,(或是吸取0.1稀釋液,用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板),放進(jìn)36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48±2小時(shí)。b.從每個(gè)平板上至少挑取1個(gè)可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)。c.結(jié)果報(bào)告:B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)為陽性,即報(bào)告手(工器具)上有金黃色葡萄球菌存在。a.以無菌操作,選擇3個(gè)稀釋度各取1mL樣液分別接種到含7.5﹪氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中,每個(gè)稀釋度接種三管。b.置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板,置36℃±1℃ 培養(yǎng)45~48小時(shí)。c.從B-P瓊脂平板上,挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養(yǎng)基,36℃±1℃培養(yǎng)20~24小時(shí)。d.取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗(yàn),記錄試驗(yàn)結(jié)果。e.報(bào)告結(jié)果:根據(jù)凝固酶試驗(yàn)結(jié)果,查MPN表報(bào)告每25cm2食品接觸面中或每只手的金黃色葡萄球菌值。3、工廠環(huán)境中病原體的檢測(cè)計(jì)劃與方法檢測(cè)計(jì)劃:為了保證食品安全,工廠應(yīng)該對(duì)生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)估,檢測(cè)項(xiàng)目包括李斯特菌,沙門氏菌等病原體微生物,化驗(yàn)室應(yīng)該按照一定的計(jì)劃對(duì)生產(chǎn)場(chǎng)所環(huán)境中的病原體進(jìn)行檢測(cè),其中包括地面、下水道、 排水溝、墻壁、天花板、設(shè)備框架、運(yùn)輸?shù)闹Ъ,冷藏裝置、速凍機(jī)、傳送帶、設(shè)備的螺絲、維修工具等部位。當(dāng)某個(gè)點(diǎn)檢測(cè)到病員微生物時(shí),應(yīng)該對(duì)環(huán)境中的相似點(diǎn)加大檢測(cè)頻率;在把所有的預(yù)定點(diǎn)檢測(cè)完后,應(yīng)該對(duì)環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進(jìn)行全面評(píng)估,在下一次環(huán)境檢測(cè)循環(huán)過程中加強(qiáng)檢測(cè)容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點(diǎn),達(dá)到持續(xù)改進(jìn)的目的。檢測(cè)頻率: 每月兩次,每次每個(gè)區(qū)域至少選取5個(gè)檢測(cè)點(diǎn),分別進(jìn)行檢測(cè)。(1)環(huán)境李斯特菌的檢測(cè)方法(3MTM PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測(cè)試片)①用涂抹棒,海綿或者其他采樣設(shè)備收集環(huán)境樣本。②將收集的樣本添加10mL滅菌的緩沖蛋白胨水,將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘,將樣品置于室溫(20-30℃)1小時(shí),最久不超過1.5小時(shí),以修復(fù)損傷的李斯特菌。④用移液器垂直滴加3mL樣品到下層膜中央,將上層膜緩慢蓋下,以免產(chǎn)生氣泡。⑤輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上,不要壓,扭轉(zhuǎn)或者滑動(dòng)壓板。提起壓板等至少十分鐘,以使膠體凝固。⑥將測(cè)試片透明面朝上,可疊放至十片,在37℃±1℃培養(yǎng)26-30小時(shí),可以用標(biāo)準(zhǔn)菌落記數(shù)器或者其他光學(xué)放大器判讀,不要記數(shù)圓形輪廓上的菌落,因?yàn)樗麄儾皇苓x擇性培養(yǎng)基的影響。⑦對(duì)于定性檢測(cè),根據(jù)紫紅色菌落是否存在,結(jié)果記為檢出或者未檢出。(2)環(huán)境中沙門氏菌的檢測(cè)方法①采樣地點(diǎn): 選取采樣點(diǎn)時(shí)因盡量選取微生物容易滋生的地方。a.采樣應(yīng)在生產(chǎn)開始后進(jìn)行,用已浸潤過的棉拭在選定的被測(cè)表面旋轉(zhuǎn)涂抹約100cm2的面積,然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊。 b.將樣品帶回實(shí)驗(yàn)室,每5個(gè)點(diǎn)混合成一個(gè)樣品, 登記編號(hào),按照標(biāo)準(zhǔn)及時(shí)檢測(cè),若有陽性結(jié)果出現(xiàn),應(yīng)逐步對(duì)所混合的每個(gè)點(diǎn)分別檢測(cè)。
編輯:songjiajie2010