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本測(cè)試方法采用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
2 所用的儀器和設(shè)備
2.1 高壓消毒鍋使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書(shū)操作。
2.2 恒溫培養(yǎng)箱必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度進(jìn)行校驗(yàn)。
2.3 培養(yǎng)皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。
2.4 普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌見(jiàn)附件A
3 測(cè)試步驟
3.1 采樣方法
將已制備好的培養(yǎng)皿，按潔凈室沉降菌采樣點(diǎn)布置圖的要求放置，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基面暴露30分鐘（靜態(tài)），再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。
3.2 培養(yǎng)
3.2.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3.2.2 在30℃-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h。
3.2.3 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染�？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。
3.3 菌落計(jì)數(shù)
3.3.1 用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5-10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。
3.3.2 若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
4 注意事項(xiàng)
4.1 測(cè)試用具要作滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性，準(zhǔn)確性。
4.2 采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。
4.3 對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細(xì)的記錄。
4.4 由于細(xì)菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
4.5 采樣前仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)，破損或污染的應(yīng)剔除。
5 測(cè)試規(guī)則
5.1 沉降菌檢測(cè)前，被檢測(cè)潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速控制在規(guī)定值內(nèi)。
5.1.2 沉降菌檢測(cè)前，被檢測(cè)潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過(guò)消毒。
5.1.3 測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。
5.2 測(cè)試人員
5.2.1 測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。
5.2.2 靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于二人。
5.3 測(cè)試時(shí)間
5.3.1 對(duì)單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)運(yùn)行不少于15min 后開(kāi)始。
5.3.2 對(duì)非單向流，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開(kāi)始。
5.4 沉降菌計(jì)數(shù)
5.4.1 采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置
最少采樣點(diǎn)數(shù)目如下表
|
面 積 m2 |
潔 凈 度 級(jí) 別 |
|||
|
A |
B |
C |
D |
|
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<10 ≥10-<20 ≥20-<50 ≥50-<100 ≥100-<200 |
2-3 5 8 16 50 |
2-3 5 8 16 50 |
2 2 2 5 10 |
2 2 2 2 3 |
|
注：表中的面積，對(duì)于單向流潔凈室，是指送風(fēng)面面積。對(duì)于非單向流潔凈室是指房間的面積。 |
||||
在滿(mǎn)足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿(mǎn)足最少培養(yǎng)皿數(shù)見(jiàn)下表
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潔凈度級(jí)別 |
所需Ф90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降30分鐘計(jì)） |
|
A、B C D |
14 2 2 |
采樣點(diǎn)的布置
工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。
可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見(jiàn)附件B。
房間采樣點(diǎn)超過(guò)10個(gè)點(diǎn)，每7天對(duì)所有采樣點(diǎn)輪流監(jiān)測(cè)一次。
5.5 記錄
監(jiān)測(cè)記錄中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、測(cè)試狀態(tài)。
5.6 結(jié)果計(jì)算
5.6.1 用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
5.6.2 平均菌落數(shù)的計(jì)算，見(jiàn)式（1）。
式(1)
式中：m 平均菌落數(shù)；
m1 1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
m2 2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
mn n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
N 培養(yǎng)皿總數(shù)。
5.7 結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：
靜態(tài)：
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潔凈度級(jí)別 |
微生物（沉降菌）最大允許數(shù) |
潔凈度級(jí)別 |
微生物（沉降菌）最大允許數(shù) |
|
個(gè)/皿 |
個(gè)/皿 |
||
|
A、B級(jí) |
0 |
D級(jí) |
5 |
|
C級(jí) |
3 |
注：表中各數(shù)值均為平均值。
5.7.1 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。
5.7.2 若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格。
6 附件
6.1 附件A：培養(yǎng)基的準(zhǔn)備及滅菌
6.1.1 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備
培養(yǎng)基應(yīng)購(gòu)買(mǎi)國(guó)家認(rèn)可的培養(yǎng)基。
6.1.2 培養(yǎng)基平皿的制備
6.1.2.1 將Ф90mm 的培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min或160℃干熱滅菌2h。
6.1.2.2 將培養(yǎng)基加熱熔化，冷至55℃時(shí)，在無(wú)菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15mL。
6.1.2.3 待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用。
6.1.2.4 注：制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。
6.2 附件B：采樣點(diǎn)布置
潔凈區(qū)采樣點(diǎn)的布置力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過(guò)于集中，某局部區(qū)域過(guò)于稀疏。
