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本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
2 所用的儀器和設備
2.1 高壓消毒鍋使用時應嚴格按照儀器說明書操作。
2.2 恒溫培養(yǎng)箱必須定期對培養(yǎng)箱的溫度進行校驗。
2.3 培養(yǎng)皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。
2.4 普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基的準備及滅菌見附件A
3 測試步驟
3.1 采樣方法
將已制備好的培養(yǎng)皿，按潔凈室沉降菌采樣點布置圖的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基面暴露30分鐘（靜態(tài)），再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。
3.2 培養(yǎng)
3.2.1 全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3.2.2 在30℃-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。
3.2.3 每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
3.3 菌落計數(shù)
3.3.1 用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5-10倍放大鏡檢查，看是否有遺漏。
3.3.2 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
4 注意事項
4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性，準確性。
4.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。
4.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細的記錄。
4.4 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
4.5 采樣前仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，如發(fā)現(xiàn)變質，破損或污染的應剔除。
5 測試規(guī)則
5.1 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速控制在規(guī)定值內。
5.1.2 沉降菌檢測前，被檢測潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。
5.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。
5.2 測試人員
5.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。
5.2.2 靜態(tài)測試時，室內測試人員不得多于二人。
5.3 測試時間
5.3.1 對單向流，測試應在凈化空調系統(tǒng)運行不少于15min 后開始。
5.3.2 對非單向流，測試應在凈化空調系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。
5.4 沉降菌計數(shù)
5.4.1 采樣點數(shù)目及其布置
最少采樣點數(shù)目如下表
|
面 積 m2 |
潔 凈 度 級 別 |
|||
|
A |
B |
C |
D |
|
|
<10 ≥10-<20 ≥20-<50 ≥50-<100 ≥100-<200 |
2-3 5 8 16 50 |
2-3 5 8 16 50 |
2 2 2 5 10 |
2 2 2 2 3 |
|
注：表中的面積，對于單向流潔凈室，是指送風面面積。對于非單向流潔凈室是指房間的面積。 |
||||
在滿足最少測點數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)見下表
|
潔凈度級別 |
所需Ф90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降30分鐘計） |
|
A、B C D |
14 2 2 |
采樣點的布置
工作區(qū)采樣點的位置離地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。
可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。采樣點位置的詳細規(guī)則見附件B。
房間采樣點超過10個點，每7天對所有采樣點輪流監(jiān)測一次。
5.5 記錄
監(jiān)測記錄中應記錄房間溫度、相對濕度、測試狀態(tài)。
5.6 結果計算
5.6.1 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
5.6.2 平均菌落數(shù)的計算，見式（1）。
式(1)
式中：m 平均菌落數(shù)；
m1 1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
m2 2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
mn n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
N 培養(yǎng)皿總數(shù)。
5.7 結果評定標準：
靜態(tài)：
|
潔凈度級別 |
微生物（沉降菌）最大允許數(shù) |
潔凈度級別 |
微生物（沉降菌）最大允許數(shù) |
|
個/皿 |
個/皿 |
||
|
A、B級 |
0 |
D級 |
5 |
|
C級 |
3 |
注：表中各數(shù)值均為平均值。
5.7.1 潔凈室（區(qū)）內的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準。
5.7.2 若某潔凈室（區(qū)）內的平均菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。
6 附件
6.1 附件A：培養(yǎng)基的準備及滅菌
6.1.1 培養(yǎng)基的準備
培養(yǎng)基應購買國家認可的培養(yǎng)基。
6.1.2 培養(yǎng)基平皿的制備
6.1.2.1 將Ф90mm 的培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min或160℃干熱滅菌2h。
6.1.2.2 將培養(yǎng)基加熱熔化，冷至55℃時，在無菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15mL。
6.1.2.3 待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平皿倒置于30℃-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用。
6.1.2.4 注：制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2℃-8℃的環(huán)境中存放。
6.2 附件B：采樣點布置
潔凈區(qū)采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。
