1. 取樣前準(zhǔn)備工作
1.1 依據(jù)檢測區(qū)域的取樣點數(shù),按照《培養(yǎng)基配制、滅菌標(biāo)準(zhǔn)操作程序》制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。 1.2 在超凈工作臺內(nèi),以無菌操作法將配制好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15mL的裝量分裝,待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。 1.3 將制備的營養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30~35℃培養(yǎng)48小時。取出逐個檢查,確認(rèn)無菌落數(shù)后即可使用。 1.4 采樣:將上述制備好的營養(yǎng)瓊脂平皿交與QA人員取樣。
2. 儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基
2.1 所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基 2.1.2 浮游菌采樣器 2.1.3 培養(yǎng)皿(φ90mm×15mm) 2.1.4 培養(yǎng)基(營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基) 2.1.5 恒溫培養(yǎng)箱
2.2 儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基的要求 浮游菌采樣器 2.2.1 浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。 2.2.2 應(yīng)嚴(yán)格按儀器說明書的要求進行操作。 2.2.3 采樣器必須按儀器的檢定周期,定期對儀器作檢定,以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性,檢驗項目有:定時器,轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速,流量計。 2.2.4 每次測試前應(yīng)先接通電源,啟動真空抽氣泵,然后調(diào)節(jié)流量計和定時器。 2.2.5 空氣采樣量根據(jù)需要選定,已知采樣器的流量(L/min),設(shè)定采樣時間(min)兩者相乘即得采樣量(L)。 2.2.6 采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造,采樣管嚴(yán)禁滲漏,內(nèi)壁應(yīng)光滑,采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測定點的高度定,盡量減少彎曲。
3. 測試方法
3.1 測試用儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。 3.1.1 采樣器進入被測房間前先用消毒劑滅菌。 3.1.2 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。 3.1.3 采樣前,先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面,采樣結(jié)束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。 3.1.4 采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌,如用消毒劑對采樣管的外壁、內(nèi)壁進行消毒,應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。 3.1.5 采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服,在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前,雙手用消毒劑消毒。
3.2 采樣程序 3.2.1 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿,開動真空泵抽氣,使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā),時間不少于5min,并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。 3.2.2 關(guān)閉真空泵,放入培養(yǎng)皿,蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣品縫隙高度。 3.2.3 置采樣器于采樣點后,開啟采樣器、轉(zhuǎn)動定時器,根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。
4. 測試規(guī)則
4.1 測試狀態(tài) 4.1.1 浮游菌測試前微生物限度檢查室已經(jīng)消毒過。 4.1.2 測試狀態(tài)為靜態(tài)測試,并在報告中注明測試狀態(tài)。
4.2 測試人員 4.2.1 測試人員必須穿戴符和被測環(huán)境級別的工作服。 4.2.2 靜態(tài)測試時,室內(nèi)人員不得多于2人。
4.3 測試時間 4.3.1 對單向流,測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。 4.3.2 對非單向流,測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。
4.4 最少采樣點數(shù)目及其布置,最小采樣量,見下表:
4.4.1 工作區(qū)測點位置離地0.8m~1.5m左右,送風(fēng)口測點位置離開送風(fēng)面30cm左右;可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。 4.4.2 每個采樣點一般采樣一次。 4.4.3 對于單向流或送風(fēng)口,采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向;對于非單向流,采樣管口向上。 4.4.4 布置采樣點時,至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上。 4.4.5 采樣時,測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)。
5. 培養(yǎng) 取樣結(jié)束后將平皿復(fù)倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30~35℃培養(yǎng)48小時。并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。
6. 菌落計數(shù)
6.1 用肉眼直接計數(shù),然后用5-10倍放大鏡檢查,是否遺漏。 6.2 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊,可分辨時,仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。計數(shù):培養(yǎng)結(jié)束,將上述培養(yǎng)后的平皿取出,逐個點計菌落數(shù),必要時用放大鏡檢查,并記錄。
7. 結(jié)果計算
7.1 平均菌落數(shù)的計算見下式:
式中:m 為該房間(或區(qū)域)的平均菌落數(shù); m1、m2‥‥‥mn 為該房間(或區(qū)域)各取樣點的菌落數(shù); N 為培養(yǎng)皿總數(shù)。
8. 結(jié)論
8.1 潔凈室(區(qū))內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。 8.2 若某潔凈室(區(qū))的平均菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn),則必須對此區(qū)域先行消毒,然后重新測試兩次,測試結(jié)果必須合格。