一、用途

大腸桿菌O157乳膠凝集檢測試劑用于從糞便樣品中經(jīng)選擇性平板分離的可疑菌落進(jìn)行快速乳膠凝集確證鑒定。可從病人腹瀉樣品中分離出的菌落快速區(qū)分大腸O157與其它大腸桿菌血清型。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

二、原理

乳膠顆粒表面包被與大腸桿菌O157脂多糖抗原具有特異性的抗體。當(dāng)敏化的乳膠顆粒遇到含有O157抗原的菌懸液時，可發(fā)生特異性、高靈敏度的免疫化學(xué)反應(yīng)，使分散的乳膠微粒迅速形成肉眼可見的凝集。

三、試劑盒組成成分

REAG TEST 測試試劑　HM44a 大腸桿菌O157乳膠測試試劑　2.5mL

乳膠顆粒包被與大腸桿菌O157具有特異性的兔抗血清。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（藍(lán)色瓶蓋）

REAG CONTROL  對照試劑　HM44b　對照乳膠試劑　　2.5mL

乳膠顆粒包被不與大腸桿菌O157反應(yīng)的兔抗體，含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（黑色瓶蓋）

NaCl 0.85%  0.85%鹽水　HM40　0.85%生理鹽水　5.0mL

含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。（白色瓶蓋）

使用說明書

檢測板

攪拌棒

需要的其它材料

l  接種環(huán)

l  山梨醇麥康凱瓊脂（含1%D－山梨醇不含乳糖的麥康凱瓊脂）

四、警告和注意事項

安全：

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測可疑致病菌時應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

檢測過程：

1、試劑盒應(yīng)按說明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對照試劑或細(xì)菌樣品。

7、使用前應(yīng)確保檢測板清潔干燥。

8、試驗時應(yīng)注意檢測過程中的質(zhì)量控制部分。

9、注意凝集狀態(tài)，呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。

五、貯存及保質(zhì)期

檢測試劑盒不使用時應(yīng)貯存在2～8℃，并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測試劑。

六、樣本

病人的樣品（血糞便樣品）應(yīng)在山梨醇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)，35～37℃有氧培養(yǎng)18～24小時。產(chǎn)毒素的大腸桿菌O157：H7菌落顏色為無色，菌落形態(tài)與其它的大腸桿菌相似。

七、檢測過程

質(zhì)量控制：

在每次使用檢測試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測以確證試劑的有效性

1、檢測試劑的控制：分別滴1滴測試試劑(HM44a)和1滴對照試劑（HM44b）于檢測板的二個反應(yīng)環(huán)內(nèi)。并在該兩個反應(yīng)環(huán)內(nèi)再分別各滴加1滴生理鹽水(HM40)，各用1支攪拌棒在整個區(qū)域內(nèi)混勻液體，輕搖檢測板30秒，觀察2個反應(yīng)環(huán)內(nèi)是否會出現(xiàn)凝集。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng)，表明測試試劑、對照試劑或生理鹽水可引起非特異性凝集，應(yīng)廢棄處理。

2、陽性對照的控制：按測試程序（如下所述），在檢測板的二個反應(yīng)環(huán)內(nèi)各滴1滴已知的大腸桿菌O157菌懸液，輕搖檢測板30秒，觀察2個反應(yīng)環(huán)內(nèi)是否會出現(xiàn)自動凝集。如果二個反應(yīng)環(huán)內(nèi)均無凝集反應(yīng)，則分別滴1滴測試試劑(HM44a) 和1滴對照試劑(HM44b)于2個測試反應(yīng)環(huán)內(nèi)，然后分別混勻檢測試劑與菌懸液，輕搖檢測板，觀察2個反應(yīng)環(huán)內(nèi)凝集結(jié)果，測試試劑反應(yīng)環(huán)內(nèi)應(yīng)出現(xiàn)明顯凝集，對照試劑反應(yīng)環(huán)內(nèi)應(yīng)無凝集發(fā)生。如果未出現(xiàn)此2種現(xiàn)象，說明試劑失效或污染，應(yīng)廢棄處理。

測試程序：

1、各滴1滴（約30μL）生理鹽水(HM40)于檢測板的2個反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從山梨醇表康凱瓊脂平板上挑取無色的可疑菌落。

3、與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合，形成均勻的混濁的菌懸液，并將菌懸液均勻涂布于整個反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

4、輕搖檢測板30秒，觀察是否會出現(xiàn)自動凝集現(xiàn)象。如果菌懸液保持均勻狀態(tài)，繼續(xù)第5步。如果菌懸液出現(xiàn)纖維狀或顆粒狀自凝現(xiàn)象，在加入乳膠試劑后易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，因此這種樣品不適合采用乳膠試劑檢測。應(yīng)選用其它方法檢測。

5、搖勻乳膠測試試劑。

6、將1滴乳膠測試試劑和1滴對照試劑分別滴加至2個反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液。不要使試劑的滴管接觸到菌懸液。

7、兩個反應(yīng)環(huán)分別用1支干凈的攪拌棒將菌懸液和乳膠試劑混合均勻。

8、輕輕搖動檢測板，在2分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，凝集反應(yīng)會產(chǎn)生明顯的乳膠顆粒凝集現(xiàn)象。

9、記錄結(jié)果后，將攪拌棒和檢測板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南�毒處理�?/span>

八、結(jié)果說明

按下表進(jìn)行判斷結(jié)果

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床或?qū)嶒炇倚畔⑦M(jìn)行判斷。

2、只可檢測山梨醇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上分離出的大腸桿菌典型菌落的純培養(yǎng)物。

3、乳膠凝集檢測的陽性結(jié)果應(yīng)采用傳統(tǒng)的大腸桿菌分型血清，即大腸桿菌O血清和H血清進(jìn)行確證試驗。

4、大部分用HKM^®大腸桿菌O157乳膠凝集試劑測試為陽性結(jié)果的在山梨醇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上分離的不發(fā)酵山梨醇的菌落可初步鑒定為O157：H7，但部分其它不發(fā)酵山梨醇的O157菌株（如H16）也可與乳膠試劑反應(yīng)。

5、HKM^®乳膠試劑經(jīng)改良已特別降低了與赫氏埃希氏菌的交叉反應(yīng)，但在極少數(shù)情況下，其可能引起交叉反應(yīng)。赫氏埃希氏菌與大腸桿菌O157可通過下列生化實(shí)驗進(jìn)行區(qū)分：纖維二糖發(fā)酵實(shí)驗、氰化鉀肉湯生長實(shí)驗和是否產(chǎn)生黃色色素實(shí)驗。(參考資料見附錄)

6、自動形成凝集現(xiàn)象的菌懸液不可用乳膠試劑盒檢測。

十、檢測效果對比

在一家醫(yī)院的微生物實(shí)驗室內(nèi)對HKM^®大腸桿菌O157乳膠凝集試劑盒檢測臨床樣品的效果進(jìn)行測試，被診斷為腹瀉、出血性結(jié)腸炎和溶血性尿毒癥綜合癥的474病人的血糞便樣品，用HKM^®大腸桿菌O157乳膠凝集試劑盒及另一商業(yè)化的乳膠凝集試劑對其中47株不發(fā)酵山梨醇的菌株進(jìn)行測試均為陽性結(jié)果。這些菌株經(jīng)傳統(tǒng)生化試驗驗證均為大腸桿菌O157菌株。

靈敏度　47/47＝100%

十一、重復(fù)性

在質(zhì)量控制檢測過程中，采用一組已詳細(xì)規(guī)定的樣品進(jìn)行監(jiān)控批間重復(fù)性，并且批間重復(fù)性已得到確證。

附錄：