在操作高效液相色譜時,流動相出現(xiàn)氣泡,由于氣泡的存在,會造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰,嚴(yán)重時會造成分析靈敏度下降;氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩(wěn)定,使基線起伏。造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條: 一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡; 二是系統(tǒng)開始工作時未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈; 三是在注入樣品時不注意混入了空氣。 而液相色譜儀在使用中,整個液路系統(tǒng)有兩個地方易產(chǎn)生氣泡!
氣泡產(chǎn)生的原因大多數(shù)是因?yàn)椋?/span> 溫度上升,壓力下降!溫度上升或柱溫上升,當(dāng)接近試劑沸點(diǎn)時,試劑汽化產(chǎn)生氣泡,試劑中已含微小氣泡,因加熱變大而產(chǎn)生氣泡。
1、泵頭 泵頭是壓力變化最劇烈的地方,也是最易產(chǎn)生氣泡的地方,泵頭靠負(fù)壓而吸液,而負(fù)壓必然使流動相中的小氣泡長大,當(dāng)泵腔變正壓時,已長大的氣泡未必能全部變小流入后續(xù)液路,則泵腔內(nèi)將積存氣泡,從而影響吸液精度,鑒于此,泵頭上專門設(shè)計(jì)了排氣閥,便于泵頭排氣,觀察柱壓穩(wěn)定了說明泵頭排氣成功。 2、吸液白管長氣泡。 a、吸液白管接觸空氣部位漏氣,產(chǎn)生可見氣泡,吸液白管是常壓和負(fù)壓交臂變化部位,其漏表現(xiàn)為大氣進(jìn)入白管內(nèi),而不易見到管內(nèi)液體漏出。 處理方法:更換白管。 b、濾頭堵:濾頭堵使得液體流入濾頭的速度下降,泵強(qiáng)制吸液而產(chǎn)生真空氣泡。 判斷:拔掉濾頭不再長氣泡則是濾頭堵。 處理:A、30%硝酸水液超洗濾頭,20分鐘左右。B、水超洗濾頭,注意換水多超幾次。 c、流動相汽化產(chǎn)生氣泡。 尤其是夏天室溫高,沸點(diǎn)低的試劑易汽化,比如:乙酸,乙醚,氨水,石油醚等易于汽化。
二、檢測流通池長氣泡
為了避免這類問題的出現(xiàn),液相色譜實(shí)際分析過程中必須重視對流動相進(jìn)行脫氣處理。 常用的脫氣方法有以下幾種: 1、吹氦脫氣法 使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣,在0.1Mpa壓力下,以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑,脫氣效果較好,但在國內(nèi)因氦氣價格較貴,本法使用較少; 2、加熱回流法 此法的脫氣效果較好; 3、抽真空脫氣法 此時可使用微型真空泵,降壓至0.05-0.07MPa即可除區(qū)溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機(jī)械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務(wù)。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化,故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應(yīng)預(yù)先脫氣后再進(jìn)行混合,以保證混合后的比例不變。 4、超聲波脫氣法 它是目前實(shí)驗(yàn)室使用最廣泛的脫氣方法,將配制好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便,基本能滿足日常分析的要求。 5、在線真空脫氣法 把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲液系統(tǒng)中,并結(jié)合膜過濾器,實(shí)現(xiàn)了流動相在進(jìn)入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法,并適用于多元溶劑體系。 其二,在液相色譜系統(tǒng)開始工作前,可以用注射器連接恒流泵的排空閥,抽入流動相,將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。 其三,在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。
1、泵頭吸液白管;
2、檢測口流通池。
壓力下降產(chǎn)生氣泡,流動相中一直包含微小氣泡,無論超聲過濾,均不能池底去掉它,那么當(dāng)壓力下降時,微小氣泡將長大,且多個小氣泡易聚集成大氣泡,而影響正常實(shí)驗(yàn)。
氣泡產(chǎn)生原因及解決辦法
一、泵頭及吸液白管
處理:超聲,降室溫。
流通池是易積存氣泡的地方,其對基線影響巨大,流動相流入色譜柱后,壓力越來越小,微小氣泡將逐漸長大,而流通池截面積遠(yuǎn)大于鋼管面積,則氣泡在池內(nèi)易長大,氣泡的特點(diǎn)是長大在無外壓的情況下,很難縮小到鋼管內(nèi)經(jīng)以下流出流通池,所以它就存在了池內(nèi)。
處理方法:
1、對于示差檢測器(示差檢測器池只能耐幾個公斤壓力),只能是反復(fù)沖洗斥資,舉高廢液瓶靠廢液管內(nèi)液柱給池加一個微小反壓,所以這就靠成了示差池子排氣困難些,但無它法。