使用法瑪西亞公司的DNA/RNA濃度測定儀,測定樣品A260和A280值。根據(jù)A260/ A280比值,估測RNA質(zhì)量。一般A260/ A280比值在1.8~2.0之間,可以滿足實(shí)驗(yàn)要求。在100μl RNA原液中取1μl稀釋至250μl(DEPC處理的水),測定樣品的A260和A280的值,按下列公式計(jì)算其濃度:RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40(ng/μl)
測定 RNA濃度按以下步驟進(jìn)行操作:
⑴ 取1μl RNA原液,放在0.5ml EP管中,加入249μl dd H2O,用移液槍反復(fù)混勻。
⑵ 用dd H2O為空白對(duì)照,調(diào)節(jié)A260零點(diǎn)。
⑶ 倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液,用dd H2O沖洗比色杯,再調(diào)節(jié)A280零點(diǎn)。
⑷ 倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A280值。計(jì)算A260/ A280比值,比值≥1.8,滿足實(shí)驗(yàn)要求。
⑸ RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40(ng/μl)
測定 RNA濃度按以下步驟進(jìn)行操作:
⑴ 取1μl RNA原液,放在0.5ml EP管中,加入249μl dd H2O,用移液槍反復(fù)混勻。
⑵ 用dd H2O為空白對(duì)照,調(diào)節(jié)A260零點(diǎn)。
⑶ 倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A260值。倒掉比色杯中的RNA樣液,用dd H2O沖洗比色杯,再調(diào)節(jié)A280零點(diǎn)。
⑷ 倒掉比色杯中的水,加入稀釋并混合均勻的RNA樣液,測定A280值。計(jì)算A260/ A280比值,比值≥1.8,滿足實(shí)驗(yàn)要求。
⑸ RNA原液濃度=A260×稀釋倍數(shù)×40(ng/μl)