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      RNA變性電泳法檢測RNA質(zhì)量

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

      采用RNA變性電泳法檢測RNA質(zhì)量,方法如下:
      ⑴ 凝膠制備:
      制備1.2%瓊脂糖凝膠(電泳槽體積為50ml)
      ① 稱取0.6g瓊脂糖,加入43.5ml水,加熱溶解并降溫到60℃。
      ② 加入5ml 10×甲醛變性電泳緩沖液,并加入1.5ml 37%的甲醛,混合均勻。
      ③ 倒入電泳槽中制膠(甲醛有毒,制膠應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行)。
      ⑵ RNA模板準(zhǔn)備(5~7.5μg total RNA)
      ① 制備如下混合液 (9.7μl)
      10×甲醛變性電泳緩沖液: 1.25μl
      37%的甲醛: 2.2μl
      甲酰胺: 6.25μl

      ② 加入2.8μl RNA,使總體積達(dá)到12.5μl
      ③ 混合后離心5~10 sec(1 000~2 000 r/min)
      ④ 55℃加熱15 min
      ⑤ 加入2.5μl甲醛凝膠加樣緩沖液,再加點(diǎn)EB(約0.2~0.5μl),混合后離心5 sec
      ⑥ 將樣品加入點(diǎn)樣孔
      ⑦ 在5v/cm的電壓下電泳至溴酚藍(lán)帶跑到電泳槽中央(20cm長電泳槽,用95v電壓,1小時左右)

       

       

       

       
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