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      細胞凋亡的形態(tài)學檢測

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

        根據凋亡細胞固有的形態(tài)特征,人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學檢測方法。
        1 光學顯微鏡和倒置顯微鏡
        (1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發(fā)泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。
      貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。
       。2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割
      成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
        2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
        一般以細胞核染色質的形態(tài)學改變?yōu)橹笜藖碓u判細胞凋亡的進展情況。
        常用的DNA特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA的結合是非嵌入式的,主要結合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍色熒光。
        Hoechst是與DNA特異結合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml。
        DAPI為半通透性,用于常規(guī)固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml。
        結果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質的形態(tài)學改變分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質出現濃縮狀態(tài);Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;Ⅱb期的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體(圖1)。


        3 透射電子顯微鏡觀察
        結果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細胞核內染色質高度盤繞,出現許多稱為氣穴現象(cavitations)的空泡結構(圖2);Ⅱa期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體。

      圖2

       

       

       

       
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