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      微生物的分離和純化

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

      一、目的要求
      掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化物的基本操作技術(shù)。

      二、基本原理
      從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物的分離與純化。本實(shí)驗(yàn)采用平板分離法:該方法操作簡(jiǎn)便,普遍用于微生物的分離與純化,其包括兩個(gè)方面:
      1.選擇適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件等要求或者加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長(zhǎng),而抑制其它微生物生長(zhǎng)的環(huán)境,從而淘汰一些不需要的微生物;
      2.微生物在固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以是一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體,因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。獲得單個(gè)菌落的方法可通過(guò)稀釋涂布平板或平板劃線(xiàn)等計(jì)數(shù)來(lái)完成的。
      純培養(yǎng)的確定:
      1.確定其菌落觀察特征;
      2.結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征的確定。

      三、器材
      1.菌種 迷曲霉;
      2.培養(yǎng)基 高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基,查氏瓊脂培養(yǎng)基;
      3.溶液或試劑 10%酚 盛9ml無(wú)菌水的試管 盛90ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶,4%水瓊脂;
      4.儀器或者其他用具 無(wú)菌玻璃涂棒 無(wú)菌吸管 接種環(huán) 無(wú)菌培養(yǎng)皿 鏈霉素和土樣 顯微鏡 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。

      四、操作步驟
      1. 稀釋涂布平板法
      (1) 倒平板 將肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基, 高氏Ⅰ號(hào)瓊脂培養(yǎng)基;馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化,待冷至55~60℃, 高氏Ⅰ號(hào)瓊脂培養(yǎng)基加入10%酚數(shù)滴,馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基加入鏈霉素溶液;靹蚝蠓謩e倒平板,每種培養(yǎng)基倒三皿;
      (2) 制備土壤稀釋溶液 稱(chēng)取土樣10g,放入盛有90ml無(wú)菌水并帶入玻璃珠的三角燒瓶,振動(dòng)約20min,使土樣與水分混合,將細(xì)胞分散.用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻,然后用無(wú)菌吸管從此試管中吸取1ml加入另一個(gè)盛有9ml無(wú)菌水的試管中,混合均勻,以此推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6不同稀釋的土壤溶液;
      (3) 涂布 將上述每種培養(yǎng)基的三個(gè)平板地面分別用記號(hào)筆寫(xiě)上10-4,10-5,10-6三種稀釋度,然后用無(wú)菌吸管分別由10-4,10-5,10-6三管土壤稀釋液中各取0.1ml對(duì)號(hào)放入已寫(xiě)好室溫下靜置5~10min,使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基;
      (4) 培養(yǎng) 將高氏Ⅰ號(hào)瓊脂培養(yǎng)基平板;馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基平板倒置于28℃溫室中培養(yǎng)3~5day,肉膏蛋白胨平板倒置于37℃溫室中培養(yǎng)2~3day;
      (5) 挑菌落 將培養(yǎng)后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落分別挑取少許細(xì)胞接種到上述三種培養(yǎng)基的斜面上,分別置28℃和37℃溫室培養(yǎng),大菌苔長(zhǎng)出后,檢查其特征是否一致,同時(shí)將細(xì)胞涂片染色后用顯微鏡檢查是為單一的微生物。若發(fā)現(xiàn)有雜菌,需要再一次進(jìn)行分離、純化,直到獲得純培養(yǎng)。
      2.平板劃線(xiàn)分離法
      (1)倒平板 按稀釋涂布平板倒平板,并用記號(hào)標(biāo)明培養(yǎng)基名稱(chēng),土樣編號(hào)和實(shí)驗(yàn)日期;
      (2) 劃線(xiàn) 在近火焰處,左手拿皿底,右手拿接種環(huán),挑取上述的土壤懸液一環(huán)在平板上劃線(xiàn).劃線(xiàn)的方法很多,但無(wú)論采用那種方法,其目的都是通過(guò)劃線(xiàn)將樣品在平板上進(jìn)行稀釋?zhuān)怪纬蓡蝹(gè)菌落;
      (3) 挑菌落 同稀釋涂布平板法,一直到分離的微生物認(rèn)為純化為止。

       

       

       
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