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      細菌cellulase活性的檢測方法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

      cellulase活性的檢測方法很多,包括:
      1.棉線切斷法;
      采用Monod 恒溫振蕩器,將縫紉機線(15 支紗) 的一端浸入含有5 ml 酶液的試管中,
      pH 5. 0 ,40 ℃,72 r·min - 1振蕩測定紗線切斷所需時間,以此來得到酶活力。
      2.濾紙崩潰法
      采用Monod 恒溫振蕩器,將兩片濾紙(1 ×1 cm) 加入裝有5 ml 酶液試管中,40 ℃,72
      r·min - 1 ,pH 4. 0 。計算濾紙完全崩潰所需要的時間,求得酶活力。
      3.濁度法
      用0. 03 % Avicel 在pH 5. 5 ,40 ℃下經(jīng)T. koningii 酶液作用后,用其濁度的減少代表C1酶活。
      4.羧甲基纖維素鈉(CMC2Na) 為底物的粘度減少和還原力生成的測定法。
      1)CMC 粘度降低的方法(旋轉(zhuǎn)粘度計法)
      底物溶液100 g ,加酶液5 ml ,30 ℃,反應18 min ,采用旋轉(zhuǎn)粘度計測定底物第3 分鐘和第18 分鐘的粘度。用公式算出纖維素酶活單位。
      2)CMC 粘度降低的方法(工研法)
      底物溶液9 ml ,加酶液1 ml ,40 ℃,測定底物粘度減至一半時所需時間,以奧氏粘度計
      測定。以10 min 能使底物粘度降低一半的酶活做為一個單位。
      3)還原糖增加法
      底物溶液9 ml ,加酶液1 ml ,40 ℃,反應15 min ,在此條件下,生成相當于1 mg 葡萄糖
      的還原力為一個酶活力單位。
      5.巴魯阿- 斯溫(Barnch and swain) 測定法
      以水楊酸為底物,根據(jù)被水解出的水楊醇和β2D2葡萄糖的多少以比色法測定β2葡萄糖苷酶活力。
      6.染色纖維素法
      用Remazol 亮蘭使濾紙、纖維素粉或微晶纖維素等染色,酶解后在595 nm 下測釋放的著色化合物的光吸收值,以其代表酶活。
      7.快速測定纖維素酶CMC 液化活力法〔4〕
      以鉻礬作交聯(lián)劑,使羧甲基纖維素交聯(lián)產(chǎn)生粘度較大的凝膠,如瓊脂培養(yǎng)基一樣,通過凝膠液化的程度和快慢來觀測酶活的高低。此法簡便易行,目測即可,用于菌種初篩十分方便。
      1 ml 酶液,加入10 ml 鉻礬液,加入CMC 20 ml ,50 ℃保溫,觀察液化情況。
      8.平板法
      在菌種選育工作中都希望在平板上對產(chǎn)生菌直接進行篩選,這是提高工作效率的關鍵。磷酸膨脹纖維素易于制成均勻的雙層平板,纖維素酶也易形成清晰的透明圈,已在產(chǎn)纖維素酶真菌選育中廣為應用。

      在以上的各種檢測方法中,用的比較多的可能就是還原糖增加法。此外還有很多的方法用來檢測單一纖維素酶組分活力。

       

       

       
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