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（注：藍(lán)色峰為脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，黑色峰為洗脫液）
不難看出，收集到的洗脫液吸收峰變形嚴(yán)重。
考慮到兩者基質(zhì)溶劑不同，需要考察溶劑對峰形的影響。
因此小編又取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，分別用水、70%甲醇溶液配制成濃度為1ppm的上樣溶液，上機測定結(jié)果，譜圖如下：
（其中藍(lán)色峰為純水基質(zhì)，黑色峰為70%甲醇基質(zhì)）
由圖可知，直接使用洗脫液上機會存在溶劑效應(yīng)，需要將洗脫液中的甲醇除去，因此小編在洗脫步驟之后增加氮吹過程去除甲醇。
令小編沮喪的是，除去甲醇后，回收率仍然不理想（15.35%）。小編收集了上樣、淋洗步驟的流出液上機檢測，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)物未被檢出。結(jié)合上述實驗結(jié)果看，導(dǎo)致目標(biāo)物回收率低的情況可能出現(xiàn)在提取環(huán)節(jié)或固相萃取洗脫環(huán)節(jié)，目標(biāo)物可能仍保留在小柱上。
然而，整個操作過程實在太繁瑣、太不確定！再去追究哪一步出現(xiàn)問題要花大量時間！
綜合整個操作流程，涉及兩個調(diào)pH步驟，引入的誤差無法準(zhǔn)確控制；樣品提取液較少的時，繁瑣的操作難免導(dǎo)致目標(biāo)物損失。一方面，檢測結(jié)果準(zhǔn)確度不好保障，另一方面，繁瑣的流程限制了做樣速度，增加方法改良的時間成本。這樣的方法即便有效也難實現(xiàn)大批量樣品的快速處理。
那么換個思路進(jìn)行方法優(yōu)化如何？
小編想，既然原有操作復(fù)雜、回收效果也不理想，那么能否通過更換更合適的SPE小柱，實現(xiàn)對方法的整體優(yōu)化，達(dá)到準(zhǔn)確，高效的實驗效果？
小柱的選型要由目標(biāo)物性質(zhì)決定，小編首先看了一下脫氫乙酸的化學(xué)性質(zhì)：
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脫氫乙酸
脫氫乙酸鈉
這里小編發(fā)現(xiàn)，脫氫乙酸是一種有機弱酸，其離子化狀態(tài)是弱陰離子。那么，如果能使脫氫乙酸在提取和固相萃取富集環(huán)節(jié)保持離子化狀態(tài)，是否可以利用離子交換機制選擇小柱呢？
考慮至此，小編選定了月旭P-SAX小柱（強陰離子交換柱）作為SPE凈化柱。使用P-SAX小柱回收脫氫乙酸時，需要注意兩個環(huán)節(jié)：
堿性環(huán)境中上樣（脫氫乙酸離子化，被小柱吸附）；
酸性環(huán)境中洗脫（脫氫乙酸變回中性分子，失去與小柱間的作用力，被洗脫）。
在進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化后，最終的實驗步驟、譜圖、回收率如下（以洋蔥基質(zhì)為例）：
▍1、提�。�
稱取2g樣品于50mL離心管，加入5mL氫氧化鈉溶液（1mol/L），定容至25mL，渦旋混勻2min，超聲提取15min，8000r/min離心5min，上清液待凈化。
▍2、凈化
SPE柱：月旭Welchrom® P-SAX，規(guī)格：200 mg/6mL。
活化：5mL甲醇，5mL水，棄去
上樣：10ml待凈化液上樣，棄去
淋洗：5mL水，棄去，抽干
洗脫：5mL10%甲酸甲醇，收集于15ml離心管中，抽干
濃縮：40℃氮吹至約200μL，用水定容至2ml，過0.45μm水系濾膜后上HPLC檢測。
▍3、儀器條件
色譜柱：月旭Ultimate®XB-C18, 4.6×250mm, 5μm
流動相：0.02mol/L乙酸銨（pH=10）：甲醇=35:65
柱溫：35℃
進(jìn)樣量：20μL
檢測波長：484nm
流速：1.0mL/min
改進(jìn)后的提取步驟避免了國標(biāo)方法中兩次調(diào)節(jié)pH的繁瑣，操作快速、回收率更加理想。
小編后來又用黃油、辣條、面包、青團等樣品做了驗證，回收率和RSD均十分理想。
在進(jìn)行脫氫乙酸的檢測中，按方法開發(fā)步驟分別進(jìn)行了洗脫液、SPE小柱類型、前處理方法優(yōu)化。因此在某種目標(biāo)物檢測方法改進(jìn)時，需要針對目標(biāo)物性質(zhì)、SPE機制、實驗整體流程三個方面進(jìn)行，且每一個步驟都需要摸索出最佳條件，從而得出一個穩(wěn)定、高效的檢測方法。
