答：保存的是第三代復(fù)活出來后，如果采用平板或肉湯活化相當于轉(zhuǎn)接了一代，就是第四代了，如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數(shù)。如果是保存在斜面上，這一支斜面一直就是第三代，如果轉(zhuǎn)接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則，菌株活化復(fù)蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉(zhuǎn)移沒有繁殖就不是傳代，需要注意。

2.剛買回來的陽性菌株是第0代嗎？

答：一般菌株你買回來的時候上面都會寫明第幾代，常規(guī)來說都是第0代的。像購買的ATCC或CICC的凍干粉都是標記為0代的。

3.菌株傳代保存到瓷珠里一定要挑單菌落嗎？

答：不一定非挑單菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是說從同一個菌落純化出來的，以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑，寧多勿少。

4.菌株保存是-70℃還是-80℃有具體標準規(guī)定么？

答：其實是有標準的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規(guī)保藏技術(shù)規(guī)程》是關(guān)于菌株保藏的一個標準，大家可以學(xué)習(xí)一下，各個保存方式都有介紹，但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時里面還沒有收錄。

5.怎樣延長菌株的保存時間呢？

大量的實驗證明菌株在低溫、干燥、缺氧、缺營養(yǎng)的條件下保存效果是最好的，越接近這種保存條件，菌株的保存時間越長。

6.怎樣純化菌株？

純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉(zhuǎn)接一次，這就相當于純化了。

7. 我們保存的一代菌株是不是要重新傳代保存呢，認證老師會不會認為這是個錯誤？

答：應(yīng)該不會，認證老師不會提出這種問題的，不過最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些，使用時工作菌株最好使用第三代菌株，一代菌株可作為長期保存用。

8. 為何要將第三代作為工作菌株？

答：多傳代幾次后菌株的活力會明顯提高，但最多傳代到第五代后就不能用了，因為第五代后菌株雖然不會完全變異，但變異率會明顯增加，因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的，若使用第一、第二代菌株活力沒有那么強。

9.用瓷珠管反復(fù)上下?lián)u勻，有泡沫不容易吸出來，怎么辦？

答：不必特別劇烈大尺度的搖動瓷珠管，稍微上下晃動就可以；如果確實有泡沫的話可以靜置一會，讓菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。

10. 老師，霉菌需要長出孢子保存，可有霉菌孢子的圖片，長到什么程度就可以保存了呢？

保存這種黑色孢子就可以，這是黑曲霉的圖片。

11. 瓷珠管液體混勻可以吹吸么？

答：不建議吹吸，因為空氣里可能也帶有部分的細菌，萬一使用的槍頭等有菌混進去就不太好了，直接擰緊保存管蓋子后上下?lián)u晃即可。

12. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里嗎？

答：2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和綠膿桿菌要放到室溫20-25℃保存，否則會很快死亡。

13.如果TSA斜面放在冷凍里面，會有什么影響？

答：瓊脂冷凍后性狀會發(fā)生改變，會變得很軟，結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，所以不建議冷凍；如果要冷凍的話就采用甘油保存法或瓷珠保存法。

14.用瓷珠管保存產(chǎn)氣莢膜梭菌老是保存不好！做好瓷珠管之后瓷珠管要放到厭氧袋里面再放到-20℃么？

答：如果冷凍保存最好放在厭氧袋里再-20°保存，保存效果還可以；或者可以采用庖肉培養(yǎng)基保存，它是一種液體培養(yǎng)基，將產(chǎn)氣莢膜梭菌接進去然后2-8 ℃保存，可以保存一年沒有問題，在厭氧環(huán)境下保存效果最好。