手機(jī)版
許多從事分析的朋友，尤其是運用色譜分離的實驗室工作人員，多數(shù)認(rèn)為氣相色譜上手快，操作簡單，但是到了方法開發(fā)時卻不知道該從何下手了，今天小編就給大家捋一捋氣相色譜方法開發(fā)的一般步驟。
出現(xiàn)嚴(yán)重的峰拖尾現(xiàn)象怎么辦？首先檢查儀器中的隔墊、襯管和分流平板是否被污染；其次檢查色譜柱安裝是否正確，是否存在泄漏現(xiàn)象，確認(rèn)色譜柱柱端是否切割平整；若峰拖尾現(xiàn)象仍無明顯改善，選擇更換色譜柱柱效較好的色譜柱；若更換后峰拖尾現(xiàn)象無明顯改善，嘗試其他不同類型色譜柱。
出現(xiàn)嚴(yán)重的峰前伸現(xiàn)象怎么辦？首先確認(rèn)是否為色譜柱過載，調(diào)整進(jìn)樣量或者重新配制新；也可以嘗試適當(dāng)增加分流比。
一套完整的分析方法開發(fā)流程是怎樣的呢？做好下面三個步驟：
1、方法開發(fā)前信息確認(rèn)；
2、色譜柱篩選；
3、方法確認(rèn)與驗證。
1 方法開發(fā)前信息確認(rèn)
1、確認(rèn)GC分析方法開發(fā)目的；
2、確認(rèn)樣品的狀態(tài)：中控反應(yīng)液、純度樣品、溶殘；
3、確認(rèn)樣品的物理和化學(xué)性質(zhì)：溶解性和穩(wěn)定性等。
一般適合使用氣相分析方法檢測的樣品：樣品可揮發(fā)；熱穩(wěn)定性好；分子量小于500；沸點一般不超過300℃；在液相中幾乎無響應(yīng)；大部分含有四元環(huán)、五元環(huán)和六元環(huán)結(jié)構(gòu)，部分橋環(huán)螺環(huán)結(jié)構(gòu)。
注意：當(dāng)化合物為鹽酸鹽時需要進(jìn)行游離后進(jìn)樣。
2 樣品來源與與處理方法
氣相色譜能直接分析的樣品必須是氣體或液體，固體樣品分析前應(yīng)溶解在適當(dāng)溶劑中，且保證樣品不含氣相不能分析的組分（如無機(jī)鹽）或可能會損壞色譜柱的成分。
所以當(dāng)我們接到一個未知樣品時必須先了解其來源，從而估計樣品可能含有的組分以及沸點范圍。如果能確定樣品可以直接分析，那問題就簡單多了。只需要找一種合適的溶劑，比如丙酮、氯仿、己烷與苯等氣相色譜常見的溶劑。
一般來說溶劑應(yīng)該具有較低的沸點，從而使其容易與樣品分離。盡可能避免用水、二氯甲烷和甲醇做溶劑，因為他們對延長色譜柱的使用壽命不利。另外毛細(xì)管色譜柱分析時，樣品濃度不能太高，否則會造成柱超載，通常樣品濃度為mg/ml或者更低。
如果樣品中有不能直接用氣相色譜分析的組分，或者樣品濃度過低，就必須采取一些預(yù)處理手段，包括萃取、濃縮、提純等。
3 確定儀器配置
確定儀器配置就是確定方法所需要的進(jìn)樣裝置、載氣、色譜柱與檢測器。比如測定氣體揮發(fā)性成分就需要頂空進(jìn)樣器，測定痕量有機(jī)氯就需要ECD檢測器。
而色譜柱的選擇則是這其中的重中之重，毛細(xì)管色譜柱的固定相分為極性、非極性、中等極性與PLOT等。
4 GC色譜柱篩選
一般我們載氣常用氮氣，由于條件限制很多實驗室無法使用其他氣體，所以GC方法開發(fā)核心在色譜柱篩選上，色譜柱篩選思路如下：
氣相色譜常用色譜柱
色譜柱篩選過程中關(guān)注以下幾個因素：
1.峰形
1.峰形
判斷標(biāo)準(zhǔn)：峰型良好，沒有嚴(yán)重的峰前伸和峰拖尾現(xiàn)象。
出現(xiàn)嚴(yán)重的峰拖尾現(xiàn)象怎么辦？首先檢查儀器中的隔墊、襯管和分流平板是否被污染；其次檢查色譜柱安裝是否正確，是否存在泄漏現(xiàn)象，確認(rèn)色譜柱柱端是否切割平整；若峰拖尾現(xiàn)象仍無明顯改善，選擇更換色譜柱柱效較好的色譜柱；若更換后峰拖尾現(xiàn)象無明顯改善，嘗試其他不同類型色譜柱。
出現(xiàn)嚴(yán)重的峰前伸現(xiàn)象怎么辦？首先確認(rèn)是否為色譜柱過載，調(diào)整進(jìn)樣量或者重新配制新；也可以嘗試適當(dāng)增加分流比。
2.峰高
根據(jù)峰高確認(rèn)合適的樣品濃度以及良好的靈敏度。GC樣品濃度一般為10-100mg/mL，峰高在1000-6000；“樣品濃度”不僅指樣品配制濃度，而是指進(jìn)入色譜柱后分離進(jìn)入檢測器的濃度。
根據(jù)峰高確認(rèn)合適的樣品濃度以及良好的靈敏度。GC樣品濃度一般為10-100mg/mL，峰高在1000-6000；“樣品濃度”不僅指樣品配制濃度，而是指進(jìn)入色譜柱后分離進(jìn)入檢測器的濃度。
若靈敏度較差，可以改善以下參數(shù)：
-
提高進(jìn)樣濃度，若提高后靈敏度仍然很差，考慮更換色譜柱和檢測方法；
-
降低分流比（分流比不能太低）；
-
提高汽化效率（降低汽化分流歧視效應(yīng)）。
3.保留時間
定義：從進(jìn)樣開始到某個組分的色譜頂點的時間間隔稱為該組分的保留時間。
若保留時間出現(xiàn)漂移，檢測氣體流速是否正常；檢查升溫程序是否正常；檢查色譜柱是否被污染；檢查隔墊和色譜柱的連接處是否由泄漏；檢查是否用錯稀釋劑；檢查分流管路是否堵塞；檢查色譜柱規(guī)格是否發(fā)生變換。
4.分離度
4.分離度
當(dāng)分離度（R）＞1.5時，滿足檢測要求。當(dāng)分離度（R）＜1.5時，嘗試在原有體系里調(diào)整梯度進(jìn)行分離。若嘗試調(diào)整梯度，R＜1.5，考慮換其他類型色譜柱和檢測方法。
5 分析方法確認(rèn)
一般新開發(fā)的分析方法不需要驗證全部項目，主要關(guān)注：專屬性、回收率、靈敏度（檢測限）、溶液穩(wěn)定性幾個因素。一般這幾個指標(biāo)符合要求，分析方法一般都能通過方法驗證。
6 分離條件優(yōu)化
這是一個很大的課題，當(dāng)儀器配置與樣品確定之后，技術(shù)人員主要做的條件優(yōu)化工作一般是改變柱溫與載氣流速，直至調(diào)整色譜柱類型，以達(dá)到最好的分離效果，柱溫比載氣流速對分離效果的影響更大。
此外，通過保留指數(shù)與GC/MS的方法可以給未知組分定性，常用的內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法給待測物質(zhì)定量。
此外，通過保留指數(shù)與GC/MS的方法可以給未知組分定性，常用的內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法給待測物質(zhì)定量。
