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紫外分光光度計是我們實驗室常用的定性、定量儀器，是我們檢測及科研必不可少的設(shè)備，用了這么多年的老搭檔你了解它嗎？今天小編就跟你好好分析一下，紫外分光光度計的干貨，一起看看吧。
在一般分光光度計的使用說明書上，要求儀器預(yù)熱時間約20分鐘；若是帶微處理器的分光光度計，開機后儀器自動進入自檢(初始化)狀態(tài)，約需10分鐘左右。
在分光光度計預(yù)熱這個環(huán)節(jié)上，很多使用者或多或少存在問題，如開機只預(yù)熱電路系統(tǒng) (不調(diào)節(jié)波長、打開吸收池暗箱蓋預(yù)熱等)或認(rèn)為初始化過程就是預(yù)熱等。
對帶微處理器有自檢功能的分光光度計，開機后儀器自檢 (初始化)結(jié)束后，在測定窗口上，設(shè)置所需波長值， 用一個吸收池裝上純凈水置于光路上，調(diào) “0000A”后，預(yù)熱儀器，當(dāng)儀器顯示讀數(shù)不再變化后即可進行測定。
分光光度計在測定過程中，發(fā)現(xiàn)同一個溶液在不同時間里其測定結(jié)果不同，即重復(fù)性不好，其原因是什么?排除測定錯誤因素外，可能原因有：
(1)儀器預(yù)熱時間不夠或預(yù)熱方法不對所造成，應(yīng)延長預(yù)熱時間或采用正確的預(yù)熱方法。
(2)光電轉(zhuǎn)換器 (如光電管)因長時間使用其光電轉(zhuǎn)換 效率發(fā)生了變化導(dǎo)致。這時標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度都 同樣變低，在相對定量時對結(jié)果影響很小。但是對這類儀器，一般建議連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h，若需長時間使用，最好間歇30min 。
(1)儀器預(yù)熱時間不夠或預(yù)熱方法不對所造成，應(yīng)延長預(yù)熱時間或采用正確的預(yù)熱方法。
(2)光電轉(zhuǎn)換器 (如光電管)因長時間使用其光電轉(zhuǎn)換 效率發(fā)生了變化導(dǎo)致。這時標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度都 同樣變低，在相對定量時對結(jié)果影響很小。但是對這類儀器，一般建議連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h，若需長時間使用，最好間歇30min 。
樣品室的主要作用就是放置樣品，液體測試一般使用比色皿，比色皿分為石英和玻璃兩種，玻璃比色皿主要用于可見區(qū)（320nm-2500nm），在紫外區(qū)有吸收，不適用于紫外區(qū)，石英比色皿可以用于紫外可見近紅外區(qū)（190nm-2500nm），另外有些透明有機玻璃也可以用作吸收池。
（1）比色皿上方通常會有字母標(biāo)識，各型號標(biāo)識稍有差別，玻璃比色皿口沿處有“G”(Glass 玻璃) ，而石英比色皿口沿處有“Q”(Quartz 石英) 或者 “S”（Silicide石英玻璃）。
（2）使用紫外可見光分光光度計來鑒別玻璃、石英比色皿：現(xiàn)行國家檢定規(guī)程規(guī)定石英比色皿在250nm下吸光度應(yīng)小于0.07abs，若吸光度大于0.07abs 則為玻璃比色皿。
使用需要配對的比色皿，在可適用的相同波長下，以空氣或者純水為介質(zhì)，使用透光率T進行測量，將每組比色皿中的一只透射率調(diào)為100%，然后測量另外一只透光率，凡透射率之差不超過0.5%T，即可配對使用。
比色皿是分析過程中對結(jié)果有很大影響的一個因素，比色皿污染之后對測試的影響更大，會使測試不穩(wěn)定甚至結(jié)果不準(zhǔn)，因此完成樣品測定之后，必須徹底清洗比色皿，下列清洗流程僅供參考：蒸餾水清洗——乙醇清洗——干燥。
如果比色皿被污染，請按照如下流程清洗：在洗滌劑中浸泡約10min（30-50℃）——蒸餾水清洗——再加有少量雙氧水的稀硝酸中浸泡約30min——蒸餾水清洗——干燥。
注：如果比色皿被有機物污染，請先用如丙酮等有機溶劑將有機物洗去并用蒸餾水清洗。
值得注意的是：分析實驗常用的鉻酸洗液不宜用于比色皿洗滌，這是因為帶水的比色皿在該洗液中可能會產(chǎn)生熱量，致使比色皿膠接面裂開而損壞。同時經(jīng)洗液洗滌后的比色皿還可能殘存微量鉻(鉻在紫外區(qū)有吸收) ，因此會影響實驗的測定。
1、使用的吸收池必須潔凈，并注意配對使用。量瓶、移液吸管均應(yīng)校正、洗凈后使用。
2、取吸收池時，手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)，裝盛樣品以池體的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈，晾干防塵保存。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測定時除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi)，測幾個點的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度最大的波長作為測定波長，除另有規(guī)定外吸收度最大波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的測定波長±2nm以內(nèi)。
5、供試品應(yīng)取2份，如為對照品比較法，對照品一般也應(yīng)取2份。并進行平行操作，每份結(jié)果與平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。
6、選用儀器的狹縫寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度值會偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減少狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，對于大部分被測品種，可以使用2nm縫寬。
1、若實驗中需大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點。然后再測量。
2、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調(diào)零。
3、比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5、一般的分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光 電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在 預(yù)熱時，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7、比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進行每次測試前均應(yīng)進行比較。具體方法如下：
