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      分光光度計(jì)的測量誤差來源,你了解么?

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2017-06-14  來源:食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù)公眾號
      核心提示:分光光度計(jì)是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性,以較純的單色光作為入射光,測定物質(zhì)對光的吸收,從而對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器。在使用過程中常常會(huì)出現(xiàn)測量誤差,這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢?
      分光光度計(jì)是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性,以較純的單色光作為入射光,測定物質(zhì)對光的吸收,從而對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器。在使用過程中常常會(huì)出現(xiàn)測量誤差,這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢?

      一、儀器本身性能帶來的誤差

      1 復(fù)色光對比耳定律的偏離
      比耳定律成立的前提條件是入射光是單色光,但是精度再高的儀器,即使是雙單色器的分光光度計(jì),也只能獲得近乎單色的光,無法獲得純單色光,它仍然含有狹窄光通帶,具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會(huì)導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離。固定狹縫的紫外分光光度計(jì)光譜帶寬一般為1nm或2nm,可調(diào)狹縫的可以做到0.Inm;可見分光光度計(jì)帶寬6nm、snm,甚至十幾納米。光譜帶寬應(yīng)該是越小越好,但是隨著光譜分辨率的提高,儀器的靈敏度降低,所以選擇儀器時(shí)要綜合考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時(shí),可近似認(rèn)為符合比耳定律。
       
      2 雜散光的影響
      雜散光是指進(jìn)入檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分,它是光譜測量中誤差的主要來源。產(chǎn)生原因有:分光光度計(jì)的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計(jì)工作波段邊緣波長處,由于單色器透光率、光源輻射強(qiáng)度、檢測器靈敏度都較低,雜散光的影響更為顯著。雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測量誤差,實(shí)際工作中,在定量分析時(shí),一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度,如果在分析波長處含有雜散光,這時(shí)樣品的透光率較小,而雜散光大部分透過,使測量吸光度低于真實(shí)吸光度。
       
      3 儀器噪聲對測t的影響
      儀器噪聲也是儀器的一個(gè)重要指標(biāo),它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號,掃描100%T和0%T線,可觀察到分光光度計(jì)的絕對噪聲水平,如果儀器噪聲較大,會(huì)掩蓋較小的測量信號,一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。
       
      4 波長和吸光度準(zhǔn)確度
      樣品的每一個(gè)值都是在一定的波長下測得的,如果波長誤差很大,測出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對儀器的直接要求,更應(yīng)引起足夠的重視。國家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計(jì)透射比準(zhǔn)確度為A級士0.6%, B級土1.0%。

      二、測量條件的選擇

      1 參比溶液和溶劑的選擇
      分光光度計(jì)的測量實(shí)際上是以通過參比池的光強(qiáng)度作為入射光強(qiáng)度來測定試樣的吸光度,先調(diào)節(jié)儀器使透過參比池溶液的吸光度為零,然后讓同一束光通過樣品,使得吸光度比較真實(shí)地反映待測物質(zhì)的濃度,所以參比溶液的選擇非常重要。如果僅有待測物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收,可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液。如果顯色劑有顏色,并在測定波長下有吸收,則用顯色劑溶液作參比溶液,所加人顯色劑及其它試劑的量,與試樣中的加入量應(yīng)一致。如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有干擾,而所用顯色劑沒顏色,則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。
      正確選擇合適的溶劑,對提高分析的準(zhǔn)確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響,應(yīng)選擇高純度的溶劑;溶劑應(yīng)不與待測物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng);待測物在溶劑中要有一定的溶解度;在測定的波長范圍內(nèi),溶劑本身沒有吸收,注意常用溶劑的最短可用波長;當(dāng)用揮發(fā)性大的溶劑時(shí),測量過程中吸收池應(yīng)加蓋。
       
      2 測試波長的選擇
      當(dāng)用分光光度計(jì)對溶液進(jìn)行測定時(shí),首先需要選擇合適的測量波長。選擇的依據(jù)是該被測溶液的吸收曲線。在一般情況下,我們總是選擇最大吸收波長作為測量波長,這樣可以提高靈敏度。而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有干擾存在,就不能選最大吸收波長,而必須在保證有一定靈敏度的情況下,選擇吸收曲線中的其它波長進(jìn)行測定(曲線較平坦處對應(yīng)的波長),以消除干擾。繪制吸收曲線是正確選擇波長的有效手段和方法。 
      編輯:foodec007

       
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