是不是想想自己能在里面工作就hin激動(dòng)呢?
欣賞完實(shí)驗(yàn)室,下面就要開始上手了。
咱們第一次先從最基礎(chǔ)的來(lái),
實(shí)驗(yàn)室滅菌方法詳解
首先要明確滅菌的重要性,往輕了說(shuō),我們進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室會(huì)接觸到很多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。會(huì)有一些像細(xì)胞間一樣要求完全無(wú)菌的環(huán)境,一旦有微生物存在,我們的幾個(gè)星期甚至幾個(gè)月的心血便都會(huì)付之東流。往重了說(shuō),一些動(dòng)物解剖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可能攜帶高致病菌,對(duì)人體會(huì)有極大危害,所以實(shí)驗(yàn)室第一步滅菌,萬(wàn)萬(wàn)要認(rèn)真。
高溫滅菌法
提到高溫滅菌,相信大家日常生活中都應(yīng)該用過(guò)祖?zhèn)鞯娜f(wàn)能100度法,買個(gè)新的餐具啦,水杯啦,都會(huì)習(xí)慣性的拿開水燙一燙,意在消毒,這的確也是有一定科學(xué)依據(jù)的。高溫使微生物的蛋白質(zhì)及酶發(fā)生凝固或變性而死亡,是應(yīng)用最廣泛且有效的滅菌方法。下面我們說(shuō)兩種方法。
用高溫加高壓滅菌,不僅可殺死一般的細(xì)菌,對(duì)細(xì)菌芽胞也有殺滅效果,是最可靠、應(yīng)用最普遍的滅菌法。
生活中,我們可能是這樣
當(dāng)然實(shí)驗(yàn)室里,我們肯定更專業(yè)
圖為實(shí)驗(yàn)室常用的高壓滅菌鍋
一大波專業(yè)名詞來(lái)襲↓↓
高壓蒸氣滅菌器的類型和樣式較多,如:①下排氣式壓力蒸氣滅菌器是普遍應(yīng)用的滅菌設(shè)備,壓力升至102.9kPa,溫度達(dá)121~126℃,維持20~30分鐘,可達(dá)到滅菌目的。②脈動(dòng)真空壓力蒸氣滅菌器已成為目前最先進(jìn)的滅菌設(shè)備。滅菌條件要求:蒸氣壓力205.8kPa,溫度達(dá)132℃以上并維持10分鐘,即可殺死包括具有頑強(qiáng)抵抗力的細(xì)菌芽胞在內(nèi)的一切微生物。
注
意
事
項(xiàng)
包裹的物品不宜太大,一般應(yīng)小于30cm×30cm×50cm,大于該尺寸需要酌情延長(zhǎng)滅菌時(shí)間;
1.高壓鍋內(nèi)的包裹不要排得太密,以免妨礙蒸氣透入,影響滅菌效果;
2.對(duì)塑料制品不宜放置過(guò)于擁擠,以免發(fā)生形變;
3.壓力、溫度和時(shí)間達(dá)到要求時(shí),指示帶上和化學(xué)指示劑即應(yīng)出現(xiàn)已滅菌的色澤或狀態(tài);
4.銳性器械,如刀、剪不宜用此法滅菌,以免變鈍;
5.瓶裝液體滅菌時(shí),如有塑料瓶蓋要適當(dāng)旋松瓶蓋,并用牛皮紙或紗布包扎瓶口;如有橡皮塞時(shí),應(yīng)插入針頭排氣,切記要保持瓶?jī)?nèi)外的連通,防止高溫膨脹爆裂;
6.注明滅菌日期和物品保存時(shí)限,一般可保留1~2周;
7.應(yīng)有專人負(fù)責(zé),每次滅菌前,應(yīng)檢查安全閥的性能,以防壓力過(guò)高發(fā)生爆炸,保證安全使用。
干熱適用于易被濕熱損壞和在干燥條件下使用更方便的物品(如金屬、玻璃、陶瓷及凡士林紗布條等)滅菌。由于其對(duì)烤箱要嚴(yán)格要求(國(guó)內(nèi)產(chǎn)的烘箱質(zhì)量都有點(diǎn)懸),且大功率、高溫下危險(xiǎn)系數(shù)較大,一般不建議使用!
當(dāng)然我們不是這么像軍訓(xùn)時(shí)的太陽(yáng)
那樣干熱
而是,當(dāng)當(dāng)當(dāng)當(dāng)~
滅菌條件為:160℃維持2小時(shí);170℃維持1小時(shí);180℃維持30分鐘;特殊情況下,如需要滅活器械、容器中對(duì)于溫度超級(jí)穩(wěn)定的RNase時(shí),才考慮使用(其實(shí)也可以DEPC預(yù)處理器械、容器、溶劑等,然后濕熱滅菌。
注意
1.對(duì)滅菌對(duì)象的理化性質(zhì)有一定了解,明確對(duì)象在高溫下的穩(wěn)定性;
2.對(duì)設(shè)備的情況、參數(shù)有清醒認(rèn)識(shí),了解設(shè)備的溫度設(shè)計(jì)上限;
3.專項(xiàng)供電,確保接入電路足夠負(fù)荷;
4.滅菌過(guò)程中,相關(guān)人員要實(shí)時(shí)在崗監(jiān)管,不得離崗,如遇特發(fā)情況及時(shí)切斷電源!
過(guò)濾是物理阻留的方法將細(xì)菌除去,適用的是熱不穩(wěn)定試劑。不要以為是物理法就除不干凈細(xì)菌,我們用的可是孔徑為0.22μm的微濾膜,甚至是孔徑更小的納濾膜(孔徑可達(dá)20 -50nm )。
當(dāng)然,孔徑小,流速自然也就慢一些,所以我們一般用小孔徑濾膜過(guò)濾之前會(huì)使用大孔徑的濾膜進(jìn)行預(yù)過(guò)濾。
在正式過(guò)濾前,必須進(jìn)行過(guò)濾系統(tǒng)的密閉性和濾膜的完整性測(cè)試。過(guò)濾過(guò)程要在等級(jí)A的潔凈室內(nèi)進(jìn)行(通常可在超凈臺(tái)完成)。
紫外線滅菌
從左到右分別是X-射線、紫外光?梢(jiàn)光、紅外光,光的波長(zhǎng)依次遞增。常用的殺菌波長(zhǎng)254納米位于紫外光中遠(yuǎn)紫外線(UVC)波段。
紫外線的定義是波長(zhǎng)在10納米到400納米之間的電磁輻射。不過(guò)在實(shí)際應(yīng)用中,我們一般使用的波長(zhǎng)一般在100納米以上。我們?nèi)粘?吹降囊恍╋埖昀锏耐肟旯窭锘蛘咭恍┦称芳庸さ牡胤接玫淖仙臒艟褪怯玫倪@種方法。
總的來(lái)說(shuō),紫外線的穿透能力比較差,通常也就能穿透兩三厘米的厚度。但如果用在某些物質(zhì)短時(shí)間滅菌,效果還是很好的。
1.選擇紫外燈時(shí),應(yīng)該仔細(xì)核對(duì)型號(hào)、適用范圍和注意事項(xiàng)。不要進(jìn)入開啟紫外消毒燈的室內(nèi)。千萬(wàn)不要對(duì)著消毒燈驗(yàn)鈔或者觀察熒光,任何時(shí)候都不應(yīng)該直視紫外燈管。紫外燈應(yīng)該盡可能只在封閉空間內(nèi)小范圍使用,并避免不必要的暴露
2.在使用過(guò)程中,應(yīng)保持紫外線燈表面的清潔,一般每?jī)芍苡镁凭耷虿潦靡淮危l(fā)現(xiàn)燈管表面有灰塵、油污時(shí),應(yīng)隨時(shí)擦拭
3.用紫外線消毒物品表面時(shí),應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射,且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量
化學(xué)滅菌法
(1)浸泡法 選用殺菌譜廣、腐蝕性弱、水溶性消毒劑,將物品浸沒(méi)于消毒劑內(nèi),在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時(shí)間內(nèi),達(dá)到消毒滅菌目的。
(2)擦拭法 選用易溶于水、穿透性強(qiáng)的消毒劑,擦拭物品表面,在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時(shí)間里達(dá)到消毒滅菌目的。
(3)薰蒸法 加熱或加入氧化劑,使消毒劑呈氣體,在標(biāo)準(zhǔn)的濃度和時(shí)間里達(dá)到消毒滅菌目的。
適用于室內(nèi)物品及空氣消毒或精密貴重儀器和不能蒸、煮、浸泡的物品(血壓計(jì)、聽(tīng)診器以及傳染病人用過(guò)的票證等),均可用此法消毒。
(4)噴霧法 借助普通噴霧器或氣溶膠噴霧器,使消毒劑產(chǎn)生微粒氣霧彌散在空間,進(jìn)行空氣和物品表面的消毒。
(5)環(huán)氧乙烷氣體密閉消毒法 將環(huán)氧乙烷氣體置于密閉容器內(nèi),在標(biāo)準(zhǔn)的濃度、濕度和時(shí)間內(nèi)達(dá)到消毒滅菌目的。
火焰滅菌法
是指用火焰直接燒灼的滅菌方法。該方法滅菌迅速、可靠、簡(jiǎn)便,適合于耐火焰材料(如金屬、玻璃及瓷器等)物品與用具的滅菌,不適合藥品的滅菌。
最常見(jiàn)的火焰滅菌,酒精燈。
圖為加熱接種環(huán)
注意
1、酒精燈的燈芯要平整.
2、添加酒精時(shí),不超過(guò)酒精燈容積的2/3;酒精不少于1/4.
3、絕對(duì)禁止向燃著的酒精燈里添加酒精,以免失火.
4、絕對(duì)禁止用酒精燈引燃另一只酒精燈.
5、用完酒精燈,必須用燈帽蓋滅,不可用嘴去吹.
6、不要碰倒酒精燈,萬(wàn)一灑出的酒精在桌上燃燒起來(lái),應(yīng)立即用濕布撲蓋.
以上就是實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方法,有了它們,實(shí)驗(yàn)室一切微生物統(tǒng)統(tǒng)不怕。