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      出廠檢驗常見微生物指標檢驗方法(包括菌落總數(shù)、大腸菌群等)!

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-08-24
      核心提示:出廠檢驗常見微生物指標檢驗方法   在我國的32大類食品生產(chǎn)許可中大都有菌落總數(shù)和大腸菌群的出廠檢驗的規(guī)定,菌

      出廠檢驗常見微生物指標檢驗方法


       

        在我國的32大類食品生產(chǎn)許可中大都有菌落總數(shù)和大腸菌群的出廠檢驗的規(guī)定,菌落總數(shù)和大腸菌群作為食品中安全指標,也是影響產(chǎn)品質(zhì)量問題的常見指標,常常受到生產(chǎn)企業(yè)和消費者的高度關(guān)注。



      今天,小編就帶大家一起來詳細的了解下食品中菌落總數(shù)和大腸菌群檢測方法。


       

      圖片

       


      菌落總數(shù)


      食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等)培養(yǎng)后,所得每g(ml)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。

       


      菌落總數(shù)的測定




      圖片


      1

       

      檢驗標準:

      GB 4789.2-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定

      菌落總數(shù):

      食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下(如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等)培養(yǎng)后,所得每g檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。

       

       

      01
      樣品稀釋

       

      制備1:10樣品勻液

      稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)8000 rimin- 10000r/min均質(zhì)1 min-2 min.或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中。用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2 min。制成1:10的樣品勻液。


      制備1:100樣品勻液

      用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL沿管壁慢慢注入盛有9mL稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭不要觸及稀釋液面) ,振搖試管或換用支無菌吸管反復吹打使其混合均勻。制成1:100的樣品勻液。


      制備10倍品勻液

      按上一步操作程序。制務10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用1次1mL無菌吸管或吸頭。


      取樣并制備平板

      選擇2個一3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液) ,在進行10倍遞增稀釋時,吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi),每個釋釋度做兩個平皿。同時,分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)空白對照。

      及時將15mL-20mL冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置于46士1恒溫水浴鍋中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。

      02
        培養(yǎng)

      2.1 待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),36℃士1℃培養(yǎng)48 h+2h。

      2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋薄層瓊脂培養(yǎng)基(約4mL),凝固后翻轉(zhuǎn)平板,按2.1條件進行培養(yǎng)。


       

      03
      菌落計數(shù)

      3.1 應對平皿上所有肉眼可見的菌落進行計數(shù)

       

      3.2 平板上菌落計數(shù)可使用自動化菌落計數(shù)儀,也可用肉眼觀察(必要時可用放大鏡觀察)記錄培養(yǎng)基上菌落數(shù)量和相應的稀釋倍數(shù)。

       

      3.3 選取菌落數(shù)在30-300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。

       

      3.4 如果在一個稀釋度的兩個平板中,一個平板的菌落數(shù)在30-300之間,另一個大于300或小于30時,則以30-30之間平板菌落數(shù)作為本稀釋度結(jié)果記錄。

       

      3.5 如所有平板的菌落數(shù)均在30CFU以下,則記錄平板中具體的菌落數(shù);如果沒有菌落生長,則記錄為小于1CFU。

       

      3.6  如平板上菌落數(shù)大于300CFU,則記錄為多不可計;但如果所有稀釋度的平板上落數(shù)均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數(shù)、其他稀釋度平板記錄為多不可計。

       

      3.7 同一稀釋度的兩個平行平板中,一個平板有較大片狀落生長時、應不進行計數(shù),而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)。

       

      3.8 如果同一稀釋度的兩個平行平板均有片狀菌落生長,選取片狀菌落不到平板一半,而剩余一半落分布均勻的平板,計數(shù)一半平板落數(shù)并乘以2代表全皿菌落數(shù)。

       

      3.9 當平板上出現(xiàn)菌落同無明顯界線的狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。

      04
      結(jié)果計數(shù)

      4.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在30-300CFU之間,計算兩個平板菌落數(shù)的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數(shù),作為每g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

       

      4.2 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

       

      4.3 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均大于300CFU,則應按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

       

      4.4 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。

       

      4.5 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30-30CFU之間,其中一部分小于30CFU或大于300CFU時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

       

      4.6 若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時,除30-300FU范圍之外的平板,按如下公式計算:

       

      05
      結(jié)果報告

      5.1 菌落計數(shù)以落形成單位(colony-forming units,CFU)表示,稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以 CFU/ml為單位報告,表面取樣以 CFU/cm2為單位報告。

       

      5.2 菌落數(shù)小于100CFU時,按”四舍五入”原則修約,以整數(shù)報告。

       

      5.3 菌落數(shù)大于或等于100CFU時,將第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數(shù)字,后面用0代替位數(shù),也可用10的指數(shù)形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數(shù)字。

       

      5.4 若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù),則報告菌落延。

       

      5.5 若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結(jié)果無效。

      注:菌落總數(shù)結(jié)果計算與報告方式實例見表2.1

      圖片

       

      大腸菌群               


       


          主要來源于人畜糞便,是以糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。

       

       

      01

      大腸菌群分布較廣,在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。




       

            調(diào)查研究表明,大腸菌群細菌多存在于溫血動物糞便、人類經(jīng);顒拥膱鏊约坝屑S便污染的地方,人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主,而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。

       

       

      02

      大腸菌群的測定




       

      GB 4789.3-2016 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數(shù) MPN法



       

       

       

      01
      樣品稀釋

       

      固體和半固體樣品:

      ·稱取25g樣品,放入盛有225mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯 內(nèi) ,8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min,或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無 菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min,制成1∶10的樣品勻液。 


      液體樣品:

       

      ·以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶 (瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)或其他無菌容器中充分振搖或置于機械振蕩器中振搖,充分混勻,1∶10的樣品勻液


      ·用1mL 無菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1mL,沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖 液或生理鹽水的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支1mL無菌吸管反復吹打,使其混合均勻,制成1∶100的樣品勻液。 

       

      ·根據(jù)對樣品污染狀況的估計,按上述操作,依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋 1次,換用1支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過程不得超過15min。

       

      02
      初發(fā)酵試驗

      每個樣品,選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個稀釋度接種3管 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯,每管接種1mL(如接種量超過1mL,則用雙料 LST肉湯),36 ℃± 1 ℃ 培養(yǎng)24h±2h,觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生,24h±2h產(chǎn)氣者進行復發(fā)酵試驗(證實試驗),如未 產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h±2h,產(chǎn)氣者進行復發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。 

       

      03
      復發(fā)酵試驗


      用接種環(huán)從產(chǎn)氣的 LST 肉湯管中分別取培養(yǎng)物1 環(huán),移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)管中, 36 ℃±1 ℃培養(yǎng)48h±2h,觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者,計為大腸菌群陽性管。

       

      04
      結(jié)果報告

      按3確證的大腸菌群 BGLB陽性管數(shù),檢索 MPN 表(見附錄 B),報告每g(mL)樣品中大腸菌群的MPN值。 


       

       

      GB/T 4789.3-2003 食品衛(wèi)生微生物學檢驗 大腸菌群測定


       

       

      01
      樣品稀釋

       

      ·制備1:10樣品勻液

      以無菌操作將檢樣25g(mL)放于含有225mI.滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1 : 10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器,以8 000 r/min~10 000 r/min的速度處理1 min,做成1 : 10的均勻稀釋液。

       

      ·制備1:100樣品勻液

       

      用1mL無菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入盛有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管中,振搖試管混合均勻,制成1:100的樣品勻液。

       

      ·制備10倍品勻液

      領(lǐng)取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。

       

      ·移取樣品

      根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或?qū)悠肺廴厩闆r的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度接種三。

       

       

      02
      乳糖發(fā)酵試驗

      將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi),接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管,lmL及以下者,用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種三管,置36 ℃± 1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣則可報告為大腸菌群陰性,如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進行。

       

      03
      分離培養(yǎng)


      將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36 ℃± 1 ℃溫箱內(nèi),培養(yǎng)18h~ 24h,然后取出,觀察菌落形態(tài),并做革蘭氏染色和證實試驗。

       

      伊紅美藍瓊脂:伊紅Y和美藍抑制絕大部分革蘭氏陽性菌的生長.伊紅Y為酸性染料,美藍為堿性染料,瓊脂是凝固劑。大腸菌群發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸時,細菌帶正電荷,所以染上伊紅(紅色),再與美藍結(jié)合形成紫黑色菌落,大部分有金屬光澤。

      03
      證實試驗

       

      在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1- 2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發(fā)酵管,置36 ℃± 1 ℃培養(yǎng)24 h±2h,觀察產(chǎn)氣情況,凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。

       

      04
      報告

      根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù),查MPN檢索表,報告每100mL (g)大腸菌群的MPN值。

      編輯:songjiajie2010

       
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      關(guān)鍵詞: 檢驗
       

       
       
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