1、培養(yǎng)基煮沸溶解后再高壓滅菌,還是直接高壓滅菌存在疑惑。
拿麥康凱瓊脂舉個例子,溶解后滅菌,平板上沒有不溶的結(jié)晶紫,沒有紫色的斑點;相對比未溶解滅菌的,平板上有結(jié)晶紫和紫色的斑點。所以正確的做法是先煮沸溶解后再高壓滅菌。
2、培養(yǎng)基PH值為什么不在標準范圍內(nèi)?
其實出現(xiàn)這個情況的問題有很多種,大致我分為這么6大點:
①質(zhì)量不好(生產(chǎn)廠家出廠時pH就不正確);
②滅菌問題(高壓滅菌溫度過高或滅菌時間過長,導(dǎo)致葡萄糖類焦化從而pH降低);
③保存時間(超過保質(zhì)期或結(jié)塊);
④水質(zhì)出現(xiàn)問題(可以用去離子水、純化水、蒸餾水不能用礦泉水、自來水);
⑤保存溫度(保存溫度過高);
⑥光線直射總結(jié)本人認為以上6點都可能導(dǎo)致培養(yǎng)基pH出現(xiàn)偏差,如果出現(xiàn)此類問題,建議逐一排查,直到問題解決。
3、培養(yǎng)基高壓滅菌時為什么會焦化?
不少檢驗人員在實驗時,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)基有焦化現(xiàn)象,我認為引起此現(xiàn)象的主要原因有以下4點:
①可能你滅菌的時候溫度超過了121℃(正常115-116℃20min即可);
②滅菌時間過長;
③培養(yǎng)基在容器中裝的太多(不要超過容器容量的80%);
④滅完菌的培養(yǎng)基在高溫環(huán)境中保存的時間過長,這些都會導(dǎo)致培養(yǎng)基發(fā)生焦化現(xiàn)象。
4、培養(yǎng)基PH怎么測定?
通常分兩種情況:
①對于無需高壓滅菌的培養(yǎng)基,先煮沸溶解后再冷卻至25℃時,測定其pH值(固體培養(yǎng)基至少測2個點,取其平均值);
②對于需要高壓滅菌的培養(yǎng)基,高壓滅菌后,冷卻至25℃測其pH(固體培養(yǎng)基至少測2個點,取其平均值)。
5、含瓊脂培養(yǎng)基在倒平板為什么有時候不凝固或凝固不好?
針對以上情況,我做了分析:
①針對需要高壓滅菌的培養(yǎng)基,倒平板時候要先搖勻(因為瓊脂分子量比較大,在冷卻過程中容易沉淀到底部,導(dǎo)致瓊脂分散不均勻);
②針對無需高壓滅菌的培養(yǎng)基,一次煮沸溶解后不能直接倒平板,應(yīng)重復(fù)煮沸溶解3-5次(因為一次不能確保瓊脂完全溶解)。
6、為什么同一品牌的不同批號,粉末顏色有差別?
分析可能有3個原因:
①此培養(yǎng)基成分含有染料或指示劑;
②不同批次粉末培養(yǎng)基含水量不同,一般要求≤6%,含水量越高,顏色越深;
③加工時球磨時間越長顏色越深。
此次分享,主要是對微生物培養(yǎng)基使用這塊會遇到的常見問題進行簡單分析,希望通過短短幾行字,能夠幫助廣大在實驗中出現(xiàn)過此類問題的同仁,其中若有不對的地方忘諸位指正,謝謝!
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