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應(yīng)廣大粉絲的需求，小編將陸續(xù)推出《微生物檢驗(yàn)問答集錦》系列。本系列所列出的問題均是微生物檢驗(yàn)過程中提問頻次較高的問題，我們咨詢專家老師后匯編，希望可以幫助微生物檢驗(yàn)從業(yè)人員對檢驗(yàn)過程中遇到的問題有新的理解。大家對感興趣的、比較關(guān)注的問題，也可以后臺留言，我們一起交流探討！
答：GB 4789.1里規(guī)定要定期進(jìn)行，沒有明確說什么時候進(jìn)行。自己實(shí)驗(yàn)室需要制定sop進(jìn)行規(guī)定，比如我們實(shí)驗(yàn)室總是檢出某個致病菌的陽性結(jié)果，就規(guī)定一個月的時間來進(jìn)行陽性對照。保證實(shí)驗(yàn)室人員具有可以持續(xù)進(jìn)行陽性檢出的能力的。最新的RB/T 038-2020 食品微生物檢測結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南文件里規(guī)定：對于日常質(zhì)量監(jiān)控,應(yīng)執(zhí)行檢測方法的規(guī)定，否則建議每批或每組樣品每20個樣品1次的頻次進(jìn)行；質(zhì)控不一定需要人工污染樣品來做，可以用標(biāo)準(zhǔn)菌株來做陽性和陰性對照。
答：目前的標(biāo)準(zhǔn)需要做，配套添加劑不需要單獨(dú)驗(yàn)收。
GB4789.28是一個最低的標(biāo)準(zhǔn)，一定要達(dá)到。比如EC肉湯只寫了大腸埃希氏菌和糞腸球菌這兩的菌株，必須要達(dá)到，如果企業(yè)自己的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)（里包含了國家標(biāo)準(zhǔn)里的菌株）高于國家標(biāo)準(zhǔn)，那就更好。
答：主要是瓊脂分布不均導(dǎo)致的。建議瓊脂類培養(yǎng)基滅菌前加熱溶解均勻（如果是大體積配制進(jìn)行分裝滅菌的培養(yǎng)基，建議煮沸溶解，攪拌分裝）；滅菌后，使用前，關(guān)注培養(yǎng)基的透光性是否均一，如果不均一，輕輕搖晃使其均勻，再傾注平皿使用。
平皿干裂縮水，與瓊脂的保水性、傾注培養(yǎng)基的量、平皿的透氣性、培養(yǎng)箱條件等因素均有關(guān)系。
a.瓊脂：不同的瓊脂在保水性方面略有差異，保水性差的瓊脂可能會出現(xiàn)嚴(yán)重縮水或者干裂。
b.培養(yǎng)基的量：傾注的培養(yǎng)基越少，平板越薄越容易干裂。按照GB4789要求，傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3 mm（直徑90 mm的平皿，通常要加入18 mL～20 mL瓊脂培養(yǎng)基）。如果平板需儲存，或者培養(yǎng)時間超過48 h或培養(yǎng)溫度高于40 ℃，則需要傾注更多的培養(yǎng)基。
c.平皿的透氣性：平板的密封性越好，保存和培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基失水越少。雖然增加平板的密封性可以減少水份流失，但并非密封性越高越好，一些需氧型微生物（如銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌等），在密閉環(huán)境中生長較差，需要良好的透氣性才能較好的生長。
d. 培養(yǎng)條件：培養(yǎng)箱是影響平皿干裂問題的關(guān)鍵因素之一。大型的培養(yǎng)箱為了保證內(nèi)部溫度均一，通常帶有較強(qiáng)的鼓風(fēng)系統(tǒng)，內(nèi)部有較強(qiáng)的空氣流動。而氣流越強(qiáng)，則越容易導(dǎo)致平皿失水。而對于一些沒有鼓風(fēng)系統(tǒng)的小型培養(yǎng)箱，則很少會出現(xiàn)平皿干裂現(xiàn)象。在培養(yǎng)箱內(nèi)擺放平皿時，應(yīng)盡量避開風(fēng)口氣流大的位置，同時遠(yuǎn)離培養(yǎng)箱內(nèi)部發(fā)熱板。
綜上所述，在遇到平板干裂縮水問題時，可通過增加平板培養(yǎng)基厚度、培養(yǎng)箱內(nèi)增加擋板降低氣流或避開風(fēng)口、選擇合適透氣性的平皿、選擇適宜瓊脂的的培養(yǎng)基等進(jìn)行綜合的考慮分析，制定對應(yīng)的方案和措施。
答：《GB4789.28 -2013培養(yǎng)基的試劑和質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)中指出，含有活性化學(xué)物質(zhì)或不穩(wěn)定性成分的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二次融化；因此對于一些已添加抗生素、卵黃、血清等不穩(wěn)定成分的培養(yǎng)基，不可以再次融化使用。而對于一般的培養(yǎng)基（未開封啟用），可使用沸水浴或采用有相同效果的方法使培養(yǎng)基融化，再次融化后未用完的培養(yǎng)基則不能重新凝固留待下次使用。
答：標(biāo)準(zhǔn)菌株存活性就是其的復(fù)活過程，我們購買的標(biāo)準(zhǔn)菌株一般是凍干粉或者凍干管，然后我們要對其進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，這個過程是必須的，否則我們沒有辦法使用。針對其存活性的驗(yàn)證，所有的標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)中都是其存活性的判斷，一個定性的判斷。復(fù)活的過程對其進(jìn)行打管，按照標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行培養(yǎng)，如果接種到液體培養(yǎng)，有肉眼可見的渾濁或者進(jìn)一步鏡檢時有目標(biāo)微生物生長；如果接種到固體培養(yǎng)上，有肉眼可見的菌落，這些都叫存活性合格。
實(shí)驗(yàn)室多久做一次沉降菌檢測，哪個標(biāo)準(zhǔn)有規(guī)定？
答：每兩周要做一次沉降菌檢測包括操作臺和房間的，方法可以參照GB/T 16294-2010，GB/T 27405-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測 食品微生物檢測》附錄中有規(guī)定。
實(shí)驗(yàn)室紫外燈怎么清潔？使用多久需要換新的紫外燈？還是說只要能用就不需要更換？
答：紫外線殺菌燈可以用紗布沾上75%酒精擦拭表面。紫外燈都有使用壽命，對于潔凈室、生物安全柜等最好能夠記錄紫外燈的使用時間，到時間后必須更換。再就是根據(jù)定期的沉降菌監(jiān)測情況更換紫外燈。
滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基，是否可以在恒溫箱或者恒溫水浴鍋過夜或更長時間存放？對培養(yǎng)基性能會有影響嗎？
答：《GB4789.28 -2013培養(yǎng)基的試劑和質(zhì)量要求》標(biāo)準(zhǔn)中指出，融化后的培養(yǎng)基放入47～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據(jù)實(shí)際培養(yǎng)基凝固溫度適當(dāng)提高水浴鍋溫度)，直至使用，培養(yǎng)基達(dá)到47℃～50℃的時間與培養(yǎng)基的品種、體積、數(shù)量有關(guān)。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不應(yīng)超過4 h。
長時間的保溫可能會造成培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分流失，靈敏度下降，培養(yǎng)效果變差，瓊脂的凝膠強(qiáng)度降低等情況，保溫過夜或更長時間這種操作方法不是很規(guī)范。一般建議在滿足試驗(yàn)安排的情況下，恒溫存放的時間越短越好。
