匯聚行業(yè)網(wǎng)友見解，傳遞微生物檢測知識，本次列出的問題均是微生物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)操作常見問題，食品微生物檢測小編咨詢專家老師后匯編，希望可以幫助朋友們對于實(shí)驗(yàn)室日常檢測問題有個新的理解。大家感興趣的、比較關(guān)注的問題，也可以后臺留言或直接微我，我們一起交流探討！

請問下，營養(yǎng)瓊脂可以做環(huán)境監(jiān)測嗎？之前用大豆酪蛋白測，這個和大豆酪蛋白效果有差距嗎？

有差距，建議用用TSA，如果沒有法規(guī)要求，NA也能拿來作為環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基。

 

請教一下霉菌培養(yǎng)皿長在培養(yǎng)基里面的是厭氧菌嗎？

培養(yǎng)基里面的菌是需氧菌或者兼性厭氧菌，空氣在瓊脂培養(yǎng)基中有一定溶解度，能滿足一般菌生長需要，但不能培養(yǎng)嚴(yán)格厭氧菌；霉菌是好氧菌，長在里面的可能是酵母，挑出來染色鏡檢

 

固體樣品稀釋倍數(shù)遞進(jìn)能取1ml到9ml里嗎？

固體樣品稀釋當(dāng)然可以取1ml到9ml。課件里是指當(dāng)液體樣品原液取樣1mL之后, 要做第一個10倍梯度稀釋時要取25mL加入225mL，后面的梯度就按1ml到9ml。

 

一次性牙簽的大腸菌群和霉菌，應(yīng)該如何

制樣檢測？
按照木牙簽國家標(biāo)準(zhǔn)（LY/T 1159-2006）中的相關(guān)規(guī)定，依照GB 14934-2016消毒餐（飲）具 進(jìn)行制樣，即棉簽擦拭法50cm2，按GB 4789.3-2016 大腸菌群計數(shù)MPN法檢測。按GB 4789.15-2016 霉菌和酵母計數(shù)，即稱量25g+225mL稀釋液均質(zhì)后進(jìn)行霉菌檢測。

 

標(biāo)準(zhǔn)儲存菌株可以傳代儲存菌株，再由儲存菌株變成工作菌株？

標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株和儲備菌株一樣，都是后代，只不過一個是第一代。所以標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株也是儲備菌株，也一樣可以拿去當(dāng)工作菌株

 

采樣用鑷子和無菌盤都是用什么辦法滅菌的呢？

滅菌條件是什么？

金屬材質(zhì)等耐高溫器皿首先采用高溫干熱滅菌，160℃，2h

菌種每次傳代都需要做鑒定嗎？

每批次按照方法驗(yàn)收一下，可以加一些項目 比如純度檢查（革蘭氏染色鏡檢看菌體的一致性，以及劃線分離后看看平板上是一種形態(tài)的菌還是幾種（大部分細(xì)菌出現(xiàn)2種以上菌落形態(tài)可能是污染的，也有少部分同1種菌出現(xiàn)不同的形態(tài)）。

工作菌種保存的問題，一般冷凍到零下70℃能保存多久？

工作菌株 1批次放斜面管里 可以保存1-2個月（冷藏就好了，個別菌不能冷藏那就室溫保存）自己規(guī)定1個月還是2個月，到期銷毀，做好記錄；冷凍保存的甘油管 不要長期冷藏保存，否則菌會死掉  甘油管不適合冷藏；-80℃下一般細(xì)菌能放5年沒問題的

如何辨別培養(yǎng)基細(xì)小的點(diǎn)是不是細(xì)菌？是不是延長培養(yǎng)時間菌落就一定會變大？

依據(jù)樣品是什么而定，下次冰箱保存一個剛稀釋的樣品做對照；TTC，是化妝品安全技術(shù)規(guī)范方法允許的，識別菌落方便。

 

看形狀看凸起：通常菌落呈現(xiàn)圓形規(guī)則外觀、突出于培養(yǎng)基瓊脂平面的，而樣品渣滓不定形、凹陷于瓊脂內(nèi)。

 

看增殖：作好標(biāo)記繼續(xù)培養(yǎng)，菌落會有擴(kuò)張。培養(yǎng)前提前拍照，與培養(yǎng)后的對照。接種時多接種一份平板，放4℃冰箱冷藏而不培養(yǎng)，用于與培養(yǎng)后的平板對照。

 

染色鏡檢：挑取可疑物，涂片子鏡檢觀察是否是菌。

速凍生制品（非即食的生制品）是否需要出廠檢測微生物？19295-2021中說非即食沒說要求檢測微生物，速凍食品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則要求出廠檢測微生物？

菌落總數(shù)與大腸菌群指標(biāo)實(shí)際上屬于指示菌指標(biāo)，即其是食品生產(chǎn)過程衛(wèi)生控制水平的表征；所以無論出廠及型式檢驗(yàn)項目中是否設(shè)定相應(yīng)指標(biāo)，均有必要作為監(jiān)測項目；出廠檢驗(yàn)按照你執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)來操作，生產(chǎn)許可證辦理按照審核細(xì)則來檢測。

冷凍食品，需要怎么解凍呢？

45℃以下不超過15min,或2-5℃以下不超過18小時解凍。條件滿足可以

像PCA、孟加拉紅這類的培養(yǎng)基需要加熱煮沸后再滅菌，只需要煮沸一次就可以了嗎？VRBA也是只需要煮沸一次嗎？

需要高壓鍋滅菌的PCA、孟加拉紅，只需加熱幫助達(dá)到溶解，形成均勻液體，入鍋滅菌。而VRBA，是煮沸滅菌，看標(biāo)準(zhǔn)的配制方法，要保持沸騰2min 。

 

      標(biāo)準(zhǔn)菌株的用途？

1：制備人工污染樣品；2：驗(yàn)收培養(yǎng)基，培養(yǎng)基做成了平板，有些是選擇性的，某種菌在上面有特殊的形態(tài)。所以菌選擇了培養(yǎng)基，培養(yǎng)基也選擇了菌；3：培訓(xùn)新人方面。讓其了解什么培養(yǎng)基上面菌是什么樣子的；4：驗(yàn)收生化試劑。和培養(yǎng)基差不多，也是有特征反應(yīng)。5：實(shí)驗(yàn)時候做質(zhì)量控制。已知菌在某培養(yǎng)基或生化上面“應(yīng)該”某種現(xiàn)象（概率），做出來后（事件）是，那就沒問題，做出來后（事件）現(xiàn)象不對，那么就可以反推是不是哪里出了問題，包括菌是不是原來的菌，大膽假設(shè)懷疑，小心求證找到原因。提高自己。

      微生物檢測各種菌，是否要做不確定度和回收率？

要做 依據(jù)RB/T 151-2016 食品微生物定量檢測的測量不確定度評估指南和SN/T 4091-2015 食品微生物學(xué)測量不確定度評估指南

      平板計數(shù)瓊脂和營養(yǎng)瓊脂都是用來測菌落的，是不是買哪一個都可以呀？

要看你用的國標(biāo)是哪一版的，不同的國標(biāo)用的培養(yǎng)基是不同的， 營養(yǎng)瓊脂和平板計數(shù)瓊脂營養(yǎng)成分不一樣，你要看你們執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)后面有培養(yǎng)基的成分要求，可以按照這個執(zhí)行要求來選擇培養(yǎng)基，一般4789.2都是用平板計數(shù)瓊脂

     食品車間的環(huán)境空氣沉降菌和食品接觸面的微生物指標(biāo)，有人知道是參考哪個標(biāo)準(zhǔn)嗎？

參考GB15975和GBT16294兩個標(biāo)準(zhǔn)，具體數(shù)值要通過檢測靜態(tài)和動態(tài)的數(shù)據(jù)后看看產(chǎn)品合格時其數(shù)值大概范圍是多少。

     培養(yǎng)基檢查和方法適用性檢查怎么體現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)記錄中？

這兩個適用性不放在日常檢驗(yàn)記錄里，要單獨(dú)起草培養(yǎng)基適用性記錄和方法適用性方案和報告。

     一次性的接種環(huán)分區(qū)劃線每次分區(qū)都需要更換一根嗎？

不需要更換，劃完一區(qū)后可以將接種環(huán)插進(jìn)培養(yǎng)基以減少環(huán)上的菌，然后再繼續(xù)劃后面的區(qū)。

 

       單增李斯特菌的翻轉(zhuǎn)運(yùn)動，用1600倍能看到嗎？具體詳細(xì)做法怎么做？

 

可以看到。將細(xì)菌懸液滴于蓋玻片（四周先涂上少量凡士林）中央，將凹玻片的凹窩對準(zhǔn)蓋玻片中央的菌液蓋下，翻轉(zhuǎn)，鏡檢。由于細(xì)菌不受蓋玻片的壓力影響，所以此法常用于觀察區(qū)別細(xì)菌運(yùn)動的方式。100倍油鏡下觀察。

 

 

      菌落計數(shù)如結(jié)果是連續(xù)三個稀釋度的結(jié)果是351、368、36、29、4、5，如何計數(shù)？

取在30-300范圍內(nèi)的計數(shù)，本例（36+29）/2=32.5, 假設(shè)，連續(xù)三個梯度分別是10倍、100倍、1000倍，結(jié)果報告為3300。