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      薄層色譜法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-05-15   瀏覽次數(shù):1224
       
      薄層色譜法,系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。
      1.儀器與材料

      1.1 玻板 除另有規(guī)定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光滑、平整,洗凈后不附水珠,晾干。

      1.2 固定相或載體 最常用的有硅膠G、硅膠GF<[254]> 、硅膠H、 硅膠HF<[254]>,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F<[254]>等。 其顆粒大小,一般要求直徑為10~40μm。薄層涂布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上, 后者系在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時),混勻后加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5~0.7%)適量調(diào)成糊狀,均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。

      1.3 涂布器 應(yīng)能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

      1.4 點(diǎn)樣器 同紙色譜法項(xiàng)下。

      1.5展開室 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,并有嚴(yán)密的蓋子,除另有規(guī)定外,底部應(yīng)平整光滑,應(yīng)便于觀察。

      2.操作方法

      2.1 薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2~0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。

      2.2 點(diǎn)樣 除另有規(guī)定外,用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm,樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時必須注意勿損傷薄層表面。

      2.3 展開 展開室如需預(yù)先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中),密封室蓋,待展開至規(guī)定距離(一般為10~15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測。

      2.4 如需用薄層掃描儀對色譜斑點(diǎn)作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點(diǎn)作掃描定量,則可用薄層掃描法。 薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說明,結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進(jìn)行比較并計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)果。

       
       
      關(guān)鍵詞: 薄層  展開  規(guī)定  色譜  掃描  固定  另有  薄層板  玻璃     
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