01流動相走空

泵工作時要留意溶劑瓶內(nèi)的流動相是否被用完，若發(fā)生空泵運轉(zhuǎn)會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。

02沒有流動相流出，又無壓力指示

1、一種原因是泵內(nèi)有大量氣體，打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉(zhuǎn)，將氣泡排盡。

2.另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需要更換。

03梯度洗脫的流動相選擇不當

1.要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。另外有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。 

2.當有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

04忽略空白梯度洗脫

1.梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認溶劑雜質(zhì)峰。

2.因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。

05流動相不過濾

1.由于任何雜質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的雜質(zhì)微粒。

2.流動相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是過濾，可通過4.5um濾膜過濾后使用，現(xiàn)配現(xiàn)用。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

06使用后不及時清洗泵？

1.如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下，或由于蒸發(fā)、泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣會損壞密封環(huán)和柱塞等。 

2.因此，必須用純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存或有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

07壓力過高或過低

壓力降低的原因則可能是管路有泄漏或堵塞。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進行。

在進行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視。

08調(diào)節(jié)流速太快

調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行，在進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過快，避免導(dǎo)致壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動影響柱內(nèi)填料的填充狀況。

09反沖色譜柱

一般說來色譜柱不能反沖，除非特別指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效，嚴重的甚至損壞色譜柱。

010不使用保護柱

為了避免將來源于色譜系統(tǒng)的污染或樣品的污染直接進入柱內(nèi)，從而縮短色譜柱的使用壽命，需要在進樣器和色譜柱之間連接保護柱從而截取不溶性顆粒和吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)。使用保護柱可大大降低分析柱受污染的程度，延長分析柱使用壽命。