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色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
01 色譜柱的活化
反相色譜柱：使用新的C18柱時(shí)，先用甲醇或乙腈沖洗20-30個(gè)柱體積，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）沖洗10個(gè)柱體積，然后再用流動(dòng)相平衡10-30柱體積。
正相色譜柱：新柱用流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積。
離子色譜柱（SAX, SCX）：新柱先用100%甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積，然后轉(zhuǎn)換到流動(dòng)相平衡。
部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流動(dòng)相中，用于反相色譜時(shí)，先用異丙醇或乙醇沖洗色譜柱50-100個(gè)柱體積。
當(dāng)用HILIC模式時(shí)，新柱用50倍柱體積50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流動(dòng)相平衡20個(gè)柱體積。
02 色譜柱的日常保存
反相柱：100%甲醇或乙腈保存。
正相柱：異丙醇或正己烷保存。
離子交換柱：100%甲醇，或大于40%的有機(jī)相保存。
切忌用緩沖鹽保存色譜柱。
03 色譜柱的清洗和再生
反相C18色譜柱
清洗：每天柱子使用完后，立刻沖洗，如果使用緩沖液，必須先用相同比例的有機(jī)相/水沖洗20個(gè)柱體積，然后再轉(zhuǎn)換到100%有機(jī)相沖洗20個(gè)柱體積。
再生：用100%水，甲醇，三氯甲烷，甲醇，100%水分別沖洗20個(gè)柱體積，在第一次用100%水時(shí)，進(jìn)樣5次200 μL二氯亞砜DMSO。
正相色譜柱
清洗：每次清洗都用低流速起步，當(dāng)檢測(cè)到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速。先用10柱體積不含其它添加劑的流動(dòng)相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑反沖色譜柱。
再生：用四氫呋喃，甲醇，四氫呋喃，二氯甲烷，正己烷分別沖洗20個(gè)柱體積。
離子色譜柱
清洗：用100%水沖洗30個(gè)柱體積去除鹽，然后用100%甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生：先用高濃度鹽的緩沖液清洗（濃度可以是5-10倍，不超過(guò)1M），然后再用100%水洗，100%乙腈或甲醇清洗，再用50%乙腈或甲醇保存。
04 色譜柱日常使用保養(yǎng)
使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）
注意色譜的pH范圍，大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-8
避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化
使用HPLC級(jí)試劑，流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理
如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈并保存在乙腈中
壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)
確認(rèn)流動(dòng)相中緩沖鹽的溶解性
確認(rèn)樣品在流動(dòng)相中的溶解性
避免壓力的突變
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01 色譜柱的活化
反相色譜柱：使用新的C18柱時(shí)，先用甲醇或乙腈沖洗20-30個(gè)柱體積，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）沖洗10個(gè)柱體積，然后再用流動(dòng)相平衡10-30柱體積。
正相色譜柱：新柱用流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積。
離子色譜柱（SAX, SCX）：新柱先用100%甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積，然后轉(zhuǎn)換到流動(dòng)相平衡。
部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流動(dòng)相中，用于反相色譜時(shí)，先用異丙醇或乙醇沖洗色譜柱50-100個(gè)柱體積。
當(dāng)用HILIC模式時(shí)，新柱用50倍柱體積50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流動(dòng)相平衡20個(gè)柱體積。
02 色譜柱的日常保存
反相柱：100%甲醇或乙腈保存。
正相柱：異丙醇或正己烷保存。
離子交換柱：100%甲醇，或大于40%的有機(jī)相保存。
切忌用緩沖鹽保存色譜柱。
03 色譜柱的清洗和再生
反相C18色譜柱
清洗：每天柱子使用完后，立刻沖洗，如果使用緩沖液，必須先用相同比例的有機(jī)相/水沖洗20個(gè)柱體積，然后再轉(zhuǎn)換到100%有機(jī)相沖洗20個(gè)柱體積。
再生：用100%水，甲醇，三氯甲烷，甲醇，100%水分別沖洗20個(gè)柱體積，在第一次用100%水時(shí)，進(jìn)樣5次200 μL二氯亞砜DMSO。
正相色譜柱
清洗：每次清洗都用低流速起步，當(dāng)檢測(cè)到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速。先用10柱體積不含其它添加劑的流動(dòng)相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑反沖色譜柱。
再生：用四氫呋喃，甲醇，四氫呋喃，二氯甲烷，正己烷分別沖洗20個(gè)柱體積。
離子色譜柱
清洗：用100%水沖洗30個(gè)柱體積去除鹽，然后用100%甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生：先用高濃度鹽的緩沖液清洗（濃度可以是5-10倍，不超過(guò)1M），然后再用100%水洗，100%乙腈或甲醇清洗，再用50%乙腈或甲醇保存。
04 色譜柱日常使用保養(yǎng)
使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）
注意色譜的pH范圍，大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-8
避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化
使用HPLC級(jí)試劑，流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理
如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈并保存在乙腈中
壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)
確認(rèn)流動(dòng)相中緩沖鹽的溶解性
確認(rèn)樣品在流動(dòng)相中的溶解性
避免壓力的突變
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