【摘要】目的建立接骨膠囊中阿魏酸的含量測(cè)定方法。方法采用反相高效液相色譜法,色譜柱：HypersilC18(4.6mm×250mm,5μm),流動(dòng)相為甲醇-1%冰乙酸(33∶67),檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm,流速為1.0mL/min。結(jié)果阿魏酸在0.12～1.2μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r＝0.9999),平均回收率為99.6%,RSD＝1.8%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,可用于控制接骨膠囊制劑的質(zhì)量。

 

【關(guān)鍵詞】接骨膠囊；阿魏酸；高效液相色譜法；含量測(cè)定

 

Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofFerulicacidinJieguCapsule.MethodThesamplesweredeterminedbyRP-HPLConaHypersilC18column(4.6mm×250mm,5μm).Themobilephaseconsistedofmethanoland1%aceticacid(33∶67).Thedetectionwavelengthwasat320nmandtheflowratewas1.0mL/min.ResultsThecalibrationcurvesofFerulicacidwaslinearintherangeof6～60μg/mL(r＝0.9999).Theaveragerecoverywas99.6%andRSDwas1.8%.ConclusionThemethodissimpleandaccurate,whichcanbeusedforthequalitycontrolofJieguCapsule.

 

Keywords：JieguCapsule；Ferulicacid；HPLC；contentdetermination

 

接骨膠囊是在接骨片[《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》(第2冊(cè))WS3-B-0402-90]的基礎(chǔ)上研制的新制劑,由四號(hào)銅粉、川芎、制川烏、當(dāng)歸、乳香(醋炙)、沒藥(醋炙)、自然銅(煅)7味中藥組成,具有散瘀、活血、止痛的功效,臨床用于跌打損傷、筋傷骨折、瘀血腫痛。阿魏酸為本品有效成分之一,且含量較高。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)接骨膠囊中的阿魏酸進(jìn)行了含量測(cè)定,為控制本品的質(zhì)量提供依據(jù)。

 

1、儀器與試藥

 

日本島津高效液相色譜儀LC-6A系列；LC-6A溶劑輸送泵；SPD-6AV紫外-可見分光檢測(cè)器；NASTA色譜工作站；7125型定量進(jìn)樣閥。接骨膠囊(自制,規(guī)格：0.2g/粒,批號(hào)070810、070812、070814)；阿魏酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào)110773-9910)。甲醇為色譜純,醋酸為分析純,水為重蒸水。

 

2、方法與結(jié)果

 

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

 

HypersilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇-1%冰乙酸(33∶67,v/v)；檢測(cè)波長(zhǎng)：320nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min。在此條件下,阿魏酸與其他組份分離度大于1.5,按阿魏酸峰計(jì)算理論塔板數(shù)不低于2000,色譜峰的對(duì)稱因子為0.95～1.05。

 

2.2溶液制備

 

2.2.1對(duì)照品溶液的制備

 

取阿魏酸對(duì)照品適量,精密稱定,用甲醇配成每1mL含0.06mg的溶液。

 

2.2.2供試品溶液的制備

 

取接骨膠囊50粒,取研細(xì)內(nèi)容物約2.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇-水(50∶50,v/v)25mL,密塞,稱定重量,超聲處理(功率200W,頻率40kHz)30min,放冷,再稱定重量,用甲醇-水(50∶50,v/v)補(bǔ)足減失的重量,混勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

 

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備

 

按照處方比例和制備工藝,制備不含川芎和當(dāng)歸的陰性模擬制劑,照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

 

2.3分析方法驗(yàn)證

 

2.3.1專屬性考察

 

取供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性對(duì)照溶液,在上述色譜條件下進(jìn)樣20μL,記錄色譜圖,結(jié)果見圖1。由色譜圖知,阿魏酸峰保留時(shí)間約15.6min,陰性對(duì)照樣品溶液在阿魏酸峰位置無干擾峰,阿魏酸與其他組份可完全分離。

 

2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

 

精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、10.0mL,分別置10mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀釋至刻度,搖勻,各進(jìn)樣20μL,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以阿魏酸濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),計(jì)算得回歸方程：Y＝82824X－560.95,r＝0.9999,表明阿魏酸在0.12～1.2μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

 

2.3.3精密度試驗(yàn)

 

精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液2.0mL,置10mL棕色量瓶中,加甲醇-水(50∶50,v/v)稀釋至刻度,搖勻,進(jìn)樣20μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果阿魏酸峰面積RSD＝1.1%。

 

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)

 

取同一批樣品(批號(hào)070810)約2g,精密稱定,共5份,按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作,測(cè)定結(jié)果的RSD＝1.7%。

 

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

 

取同一供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、24h,精密吸取20μL,注入液相色譜儀,測(cè)定阿魏酸峰面積,RSD＝1.6%,說明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

 

2.3.6加樣回收率試驗(yàn)

 

取已知含量的樣品(批號(hào)070810)約1g,精密稱定,共9份,分別加入1.5、3.0、4.5mL阿魏酸對(duì)照品溶液,按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作,按上述色譜條件測(cè)定,結(jié)果見表1。表1接骨膠囊中阿魏酸的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)

 

2.4樣品測(cè)定

 

精密吸取供試品溶液20μL,按上述色譜條件測(cè)定,3批樣品測(cè)定結(jié)果見表2。表23批樣品的阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果(略)

 

3、討論

 

樣品提取方法及條件考察[1-2]分別采用甲醇-水(50∶50,v/v)、甲醇、流動(dòng)相為溶劑,分別超聲提取15、30、60min,比較阿魏酸的含量,結(jié)果表明,樣品用甲醇-水(50∶50,v/v)超聲提取30min較為適宜。另外,本試驗(yàn)曾用甲醇-水(50∶50,v/v)加熱回流,結(jié)果阿魏酸含量與超聲提取30min比較沒有明顯提高,但因加熱回流操作繁瑣,故采用超聲提取為樣品提取方法。

 

本試驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定接骨膠囊中阿魏酸的含量,方法簡(jiǎn)便,結(jié)果可靠,可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。