刺參人工繁殖的第一個步驟,便是取得大量優(yōu)質、成熟的配子(精、卵),這是人工育苗成敗的關鍵。親參采卵的途徑有以下方法:
一、自然產卵親參采捕的時間適宜,性腺發(fā)育充分成熟,可以采用自然產卵法。
這種方法的優(yōu)點是簡單易行,基本上可以滿足育苗的需要。刺參往往在傍晚或夜間產卵、排精,不能人為控制產卵時間和產卵量,有時還會發(fā)生產卵量過大、精液過多造成水質敗壞而導致受精卵大量解體的現象。因此,應安排夜間值班人員,隨時觀察,及時收集,或達到采卵量后將親參取出放到其他池中,或將過多的雄性排精刺參移出排卵池。
二、人工刺激產卵誘導刺參排精產卵的常用方法有溫差法、紫外線海水浸泡法、陰干流水刺激法。
1.溫差法
操作溫差在蓄養(yǎng)海參的培育海水溫度下,向上或向下增減5℃~8℃為宜。誘導時,可將親參直接置入高溫水中(直接升溫);或將親參先以低水溫處理后,再以高水溫處理(先降溫后升溫);或是將親參以高低水溫反復處理(高低溫交互操作)。通常一次升(降)水溫的處理時間為1小時到隔夜不等,需視親參狀況而定。若發(fā)現有產卵跡象,應移出個體放到正常水溫環(huán)境中。
2.紫外線海水浸泡法
此方法是用經紫外線燈管照射過的海水,誘導親參生殖(其機制尚不明了)。通常10升海水,以8瓦特功率紫外線燈管照射,在水流速率10升/分鐘狀況下,需循環(huán)1小時后方視為其已達飽和。循環(huán)過程中充分曝氣,使水體中溶解氧充足。“紫外線海水”制備完成后,將親參置入其中,最高以每升紫外線海水中放一頭為限。通常雄性個體在誘導后0.5小時即排精,雌性個體則需較長時間(45分鐘到數小時不等)。在誘導過程中需仔細觀察親參狀況,遇有自割或吸水膨大的個體,需將其立即移出至正常海水環(huán)境中。
3.陰干流水刺激法
一般是在傍晚以后進行。先將蓄養(yǎng)池內的海水放干,讓親參陰干45分鐘到1小時,再用水沖擊10分鐘~15分鐘,或流水40分鐘~50分鐘,然后將親參放入加有新鮮過濾海水的池中。一般情況下2小時左右,親參開始向表層池壁爬行,移動頻繁,經常將頭部抬起在海水表層左右擺動,雄性開始排精,0.5小時后雌參開始產卵。在實際生產中陰干、流水和升降溫的方法常被結合使用。
4.氯化鉀注射法
本方法適用于體型小且成熟度高的個體。其作用機制為通過提高親參體腔體液中的鉀離子濃度,使體壁肌收縮,擠壓生殖巢而將配子排出。氯化鉀的注射濃度為0.5摩爾/升~1摩爾/升,親參濕重為0.5公斤時總注射量為5毫升,且應以1毫升~2毫升劑量每隔10分鐘注射1次,以避免刺激過度。為了盡可能不使親參自肛門排出內臟,宜以針柄將其肛門固定于水面之上。若其生殖腺成熟度高,可在短時間內排出配子。反之,若親參成熟不好則會引起自割。
5.解剖法本方法
適用于個體大且誘導生殖困難的個體(通常為雌性,卵子未達到最后成熟階段)。使用刀片自親參觸手部后方1/4體長背側處,切出約3厘米長的開口,雙手輕輕推擠親參體中段部位使其生殖巢流出。
采得的生殖腺立即以干凈海水清洗數次,防止親參的體液影響生殖腺的品質。此時所獲得的卵子通常沒有受精能力(未達到最后成熟),需加以催熟后才能進行受精。催熟的方法有藥物浸泡法及卵巢切碎法,分別敘述如下:
(1)藥物浸泡將卵巢用探針挑破,釋放出的卵子以DTT、BAL或L-Cysteine等藥品,配制成濃度為0.1摩爾/升的海水溶液,浸泡15分鐘后,以干凈海水重復清洗1小時,再進行授精。采用藥物浸泡法時,需嚴格遵守劑量及浸泡時間以免藥品對卵子造成毒害。將所采得卵子放到容器中,加入微量(約和卵量同體積)的干凈海水,隨即加入精子(一頭雌體的卵量,加入未稀釋精液1滴或已稀釋精液數滴)并且輕輕攪拌(搖晃),而后每隔5分鐘以等比例增加的量加入干凈海水稀釋。
。2)沉淀洗卵法將所采得的卵子浸泡于干凈的海水中備用,另將干凈的精液加入10倍體積海水中稀釋并使之活化。在卵液中加入精子稀釋液(一頭雌體的卵量,加入數滴精子稀釋液)并且輕輕攪拌使之充分受精。而后將精卵混合液靜置,待受精卵沉淀,吸出上層含精子海水,加入干凈海水清洗受精卵