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      硅魚精子DNA的制備

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06
          (1)在50ml滅菌聚乙烯管中加入1g鮭精DNA,加入15ml DEPC水使其浸泡5min至2h;
       。2)加入2.5ml 2mol/L HCl,室溫放置,DNA形成白色沉淀,充分振搖至沉淀物相互纏繞在一起,用吸頭尖端使之形成一球團(tuán)狀(2~3min);
       。3)加入5.0ml 2mol/L的NaOH。搖動(dòng)小管使DNA懸浮、溶解,將小管置50℃15min助溶;
       。4)用DEPC水將混合物稀釋至175ml(總體積),充分混合,注意確保管內(nèi)已無(wú)顆粒狀;
        (5)加入20ml/l 1mol/L的Tris-HCl緩沖液(pH7.4);
        (6)用2mol/L的HCl滴定至DNA溶解pH為7.0~7.5;
       。7)用無(wú)菌微孔濾膜過(guò)濾液體,去除顆粒。260nm測(cè)定溶液的OD值,方法是:取20μl DNA液混合于980μl水中,混勻后測(cè)定,吸收值乘以50即為DNA濃度(μg/ml);
       。8)制備好的DNA液儲(chǔ)于-20℃?zhèn)溆,用前取出凍融后煮沸?/div>
       

       

       
       
       
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