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      核酸分子雜交探針的選擇

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-06

        根據(jù)不同的雜交實驗要求,應(yīng)選擇不同的核酸探針。在大多數(shù)情況下,可以選擇克隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下,必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如,在檢測靶序列上的單個堿基改變時應(yīng)選用寡核苷酸探針,在檢測單鏈靶序列時應(yīng)選用與其互補的DNA單鏈探針(通過克隆人M13噬菌體DNA獲得)或RNA探針,寡核苷酸探針也可。長的雙鏈DNA探針特異性較強,適宜檢測復(fù)雜的靶核苷酸序列和病原體,但不適宜于組織原位雜交,因為它不易透過細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi)或核內(nèi)。在這種情況下,寡核苷酸探針和短的PCR標(biāo)記探針(80~150bp)具有較大的優(yōu)越性。

        在選用探針時經(jīng)常會受到可利用探針種類的限制。如在建立DNA文庫時,手頭沒有篩選特定基因的克隆探針,這時就可用寡核苷酸探針來代替。但必須首先純化該基因的編碼蛋白,并測定6個以上的末端氨基酸序列,通過反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探針。如果已有其它動物的同種基因克隆,因為人類和動物間在同一基因的核苷酸順序上存在較高的同源性,因此可利用已鑒定的動物基因作探針來篩選人類基因克隆。對于基因核苷酸序列背景清楚而無法獲得克隆探針時,可采用PCR方法擴(kuò)增某段基因序列,并克隆人合適的質(zhì)粒載體中,即可得到自己的探針。這種方法十分簡便,無論基因組DNA探針還是cDNA探針都可以容易地獲得,而且,可以建立PCR的基因檢測方法,與探針雜交方法可作對比,可謂一舉兩得。

       

       

       
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