??由于生物技術(shù)產(chǎn)品的復(fù)雜性及易變性,技術(shù)部門僅通過對(duì)終產(chǎn)品的質(zhì)量檢定難以實(shí)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)品的全面質(zhì)量控制,所以要保證產(chǎn)品的安全有效和質(zhì)量可控,研制單位必須從原材料(包括菌、毒種或細(xì)胞庫(kù))、生產(chǎn)工藝、原液、半成品、成品到貯存條件等進(jìn)行全程的質(zhì)量控制。而如何建立一套完善的質(zhì)量控制體系,對(duì)于生物制藥來說是一項(xiàng)復(fù)雜的系統(tǒng)工程,需要我們?cè)趯?shí)踐中不斷地探索。本期編發(fā)的這組稿件則從技術(shù)審評(píng)的角度,分析了目前國(guó)內(nèi)生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量控制方面的現(xiàn)實(shí)狀況,介紹了國(guó)外的一些通行標(biāo)準(zhǔn)和普遍做法,并對(duì)細(xì)胞庫(kù)的建立、生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究等五個(gè)方面提出了初步的建議和設(shè)想,值得研制單位參閱并思考。
??制劑研究對(duì)穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量的意義
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??藥物必須制成適宜的劑型才能用于臨床,因此制劑的研究工作在新藥研究與開發(fā)中占有重要的地位,對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定也有更重要的意義。但由于生物技術(shù)產(chǎn)品性質(zhì)一般不穩(wěn)定,易受各種環(huán)境因素的影響,制劑研究有相當(dāng)?shù)碾y度。目前,國(guó)內(nèi)制劑研究方面存在的主要問題是生物制藥企業(yè)通常缺少制劑學(xué)方面的專業(yè)人員,而從事生物制品研究的工作者又缺少制劑學(xué)方面的知識(shí),對(duì)制劑研究的重視程度也不夠,所以制劑研究已成為我國(guó)生物技術(shù)藥物研發(fā)中的一個(gè)薄弱環(huán)節(jié)。許多研究者在得到純化的表達(dá)產(chǎn)物后便認(rèn)為萬(wàn)事大吉,隨意加入一種或多種常用的蛋白穩(wěn)定劑(如人血白蛋白),即認(rèn)為已完成了生物藥物的研制工作。殊不知,不同的蛋白藥物可能需要不同的制劑處方,不盡合理的處方組成不但影響制品的穩(wěn)定性,而且可能會(huì)影響到成品的質(zhì)控。比如,蛋白藥物中加入人血白蛋白作為保護(hù)劑后,便很難再進(jìn)行含量或純度方面的分析,而且由于人血白蛋白屬于血源性制劑,也給終產(chǎn)品帶來了不安全的隱患。
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??以往國(guó)外生物制品的處方組成也較單一,但近年來一些國(guó)外企業(yè)對(duì)于這方面的研究工作越來越重視,像氨基酸、維生素、表面活性劑等安全性和穩(wěn)定效果俱佳的輔料逐漸被采用,使生物技術(shù)藥物的處方組成也越來越復(fù)雜,越來越多樣。
??質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待完善
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??生物制品需進(jìn)行全過程的質(zhì)量控制,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立和完善是這一過程中最重要的環(huán)節(jié)。與化學(xué)藥物相比,生物制品的檢定項(xiàng)目繁多且檢定方法復(fù)雜,按照我國(guó)現(xiàn)行的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn),對(duì)于重組產(chǎn)品來講,常規(guī)的檢定項(xiàng)目就有20多項(xiàng)。近年來,隨著國(guó)家生物制品規(guī)程的補(bǔ)充修訂及GMP的實(shí)施,國(guó)內(nèi)生物技術(shù)藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更加規(guī)范,執(zhí)行也更加到位,但對(duì)比國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的差異,國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)還有一些待改進(jìn)的地方。
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??一、成品檢定方面:目前國(guó)內(nèi)生物技術(shù)藥物的成品標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)簡(jiǎn)單,與國(guó)際上的通行標(biāo)準(zhǔn)(如ICH)和國(guó)外企業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)相比,缺少了含量和純度方面的指標(biāo),這既不利于常規(guī)質(zhì)控,又影響到成品的穩(wěn)定性研究,甚至對(duì)上市后藥品的質(zhì)量監(jiān)督產(chǎn)生影響,F(xiàn)在隨著人們法制意識(shí)的加強(qiáng),對(duì)藥品質(zhì)量問題的追溯逐漸成為制藥企業(yè)和藥品監(jiān)管部門需要面對(duì)的一個(gè)問題,而成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不完善很可能成為其中的一個(gè)隱患。過去由于技術(shù)和其它方面的考慮,大部分質(zhì)控項(xiàng)目均在原液檢定階段完成;谀壳皣(guó)內(nèi)的技術(shù)水平,應(yīng)該說是有可能進(jìn)行改進(jìn)的,如在成品檢定中增加含量和純度等方面的指標(biāo)。研究者和審評(píng)者要開始重視成品的質(zhì)控工作,我們希望由此起步,國(guó)內(nèi)生物技術(shù)藥物的成品檢定工作能逐步得以加強(qiáng)和完善。
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??二、純度及雜質(zhì)分析:生物技術(shù)產(chǎn)品的純度測(cè)定通常與檢定方法直接相關(guān),因此產(chǎn)品純度應(yīng)采用多種方法綜合評(píng)估。目前國(guó)際上經(jīng)常采用的純度分析方法包括了SDS-PAGE、等電聚焦、分子篩HPLC、反相HPLC、離子交換HPLC等,而且為了將預(yù)期產(chǎn)品與雜質(zhì)更好地分離,往往需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。以往國(guó)內(nèi)生物技術(shù)藥物一般僅采用SDS-PAGE和分子篩HPLC方法,測(cè)定結(jié)果只能說明樣品在分子量方面是大致均一的,但難以全面反映產(chǎn)品的純度。近來在大部分重組產(chǎn)品的檢定中增加了反相HPLC分析,這是一個(gè)很有意義的改進(jìn)。新的《藥品注冊(cè)管理辦法》已將雜質(zhì)分析納入申報(bào)資料要求,研制單位今后應(yīng)在純度和雜質(zhì)研究方面多做工作,特別重視產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)(指目標(biāo)蛋白的分子變異體)的分析。
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??三、內(nèi)控參比品的建立:ICH指導(dǎo)原則要求生產(chǎn)商在申報(bào)時(shí)應(yīng)建立經(jīng)標(biāo)化的內(nèi)部參比品,供生物學(xué)和物理化學(xué)檢測(cè)用。國(guó)外企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的理化分析結(jié)果判斷大多也是要求與參比品一致。鑒于蛋白藥物的特殊性質(zhì),采用某種特定方法測(cè)得的表觀值與理論值相比通常有偏差,所以采用與內(nèi)控參比品比較的方法更合理,也更能保證批間的一致性。一般情況下,國(guó)內(nèi)的研究單位往往更重視活性測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)品(或參比品)的建立,而忽視了理化分析用參比品的建立,使某些理化檢定標(biāo)準(zhǔn)難以制定或制定的標(biāo)準(zhǔn)范圍過寬,所以研制單位應(yīng)加強(qiáng)這方面的研究工作。當(dāng)然,參比品的建立是一個(gè)系統(tǒng)工程,需要研制單位、檢定部門和技術(shù)管理部門共同合作來完成。
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??四、判定標(biāo)準(zhǔn)的制定:標(biāo)準(zhǔn)的含義就是一個(gè)嚴(yán)格的衡量度,不但是廠家對(duì)自己產(chǎn)品的放行標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)也是政府和社會(huì)監(jiān)督其產(chǎn)品質(zhì)量是否合格的惟一尺度。由于生物制品的易變性,某些檢測(cè)指標(biāo)在貯存過程中難免發(fā)生變化,有時(shí)會(huì)給標(biāo)準(zhǔn)的制定帶來困難。如在貯存過程中某種蛋白藥物的氧化形式由5%增加到10%,而研究結(jié)果表明含10%氧化形式的藥物仍是安全有效的,如果將合格標(biāo)準(zhǔn)擬定為小于5%,則投放市場(chǎng)后的產(chǎn)品檢定結(jié)果可能不合格;如擬定為小于10%,則在貯存期內(nèi)難以保證產(chǎn)品的安全有效。為了解決這種問題,國(guó)外有些企業(yè)采用兩種標(biāo)準(zhǔn),即出廠標(biāo)準(zhǔn)(releasespecification)和貨價(jià)期標(biāo)準(zhǔn)(endofshelflifespecification),其中出廠標(biāo)準(zhǔn)高于有效期內(nèi)標(biāo)準(zhǔn),由此既可以保證產(chǎn)品在有效期內(nèi)的檢定結(jié)果都合格,又可以保證臨床使用中的安全有效性,值得我們參考。
??穩(wěn)定性研究需進(jìn)一步改進(jìn)
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??由于生物制品一般穩(wěn)定性較差,結(jié)構(gòu)和性質(zhì)又比較復(fù)雜,因此其產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的變化不易檢測(cè)到,穩(wěn)定性研究存在一定的難度。ICH已制定了生物技術(shù)產(chǎn)品穩(wěn)定性研究的技術(shù)要求,其中對(duì)于批數(shù)和樣品的選擇、考察指標(biāo)、考察條件、測(cè)試次數(shù)等均有明確的規(guī)定。對(duì)比該技術(shù)要求,目前國(guó)內(nèi)生物技術(shù)產(chǎn)品穩(wěn)定性研究中的問題較多,如考察批數(shù)少、考察條件單一(僅設(shè)溫度條件,而不考慮光照、反復(fù)凍溶、凍干制品溶解后的穩(wěn)定情況等)、考察指標(biāo)少(缺少含量、純度和降解產(chǎn)物等方面的分析)、對(duì)不同規(guī)格不同內(nèi)包裝的樣品不分別考慮等。由于上述問題的存在,作為制定效期依據(jù)的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)通常不是很充分,對(duì)于貯存條件的規(guī)定不是很全面,有時(shí)根據(jù)有限的結(jié)果甚至難以確定產(chǎn)品的有效期。由于穩(wěn)定性研究的缺欠很難在后續(xù)工作中彌補(bǔ),所以我們建議研究者在開展穩(wěn)定性研究前應(yīng)加強(qiáng)咨詢和論證,提出一個(gè)科學(xué)可行的試驗(yàn)方案,并應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行,以確保只要在效期內(nèi)和規(guī)定的條件下使用,產(chǎn)品的安全性及有效性都是有保障的。鑒于我國(guó)目前尚未出臺(tái)有關(guān)生物制品穩(wěn)定性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則,國(guó)內(nèi)研制單位可參照國(guó)外的相關(guān)指南并結(jié)合自身的實(shí)際情況制定試驗(yàn)方案。
??細(xì)胞庫(kù)的建立和生產(chǎn)穩(wěn)定的關(guān)系
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??建立細(xì)胞庫(kù)的目的是為了保證生產(chǎn)的持續(xù)穩(wěn)定。國(guó)外企業(yè)對(duì)于細(xì)胞庫(kù)的管理有非常嚴(yán)格的要求,如對(duì)于哺乳動(dòng)物而言,主細(xì)胞庫(kù)(MCB)和生產(chǎn)細(xì)胞庫(kù)(WCB)均需進(jìn)行細(xì)胞表型、基因型、安全性等方面的檢定。其中細(xì)胞表型檢定項(xiàng)目包括細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞形態(tài)、表達(dá)特性、同功酶分析、核型分析等;基因型分析包括限制酶譜分析、基因拷貝數(shù)、載體狀態(tài)、核酸序列、mRNA水平檢測(cè)等;安全性(外源污染)檢查包括細(xì)菌及真菌、支原體檢查和體內(nèi)體外法檢測(cè)各種病毒等。在成功建立兩級(jí)種子庫(kù)以后,研制單位還要定期進(jìn)行常規(guī)檢查,每次從WCB中取出細(xì)胞用于生產(chǎn)前,要進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)及表達(dá)特性方面的確認(rèn);同樣,在建立新的WCB時(shí)研制單位對(duì)于MCB也要進(jìn)行重新檢定(如因意外事故造成MCB的全部損失,則需按嚴(yán)格的程序重建MCB)。采用新的MCB后,研制單位不但需進(jìn)行藥學(xué)方面的比較,必要時(shí)還需進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)或臨床試驗(yàn),以確定重建MCB前后產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。為保證工程細(xì)胞在培養(yǎng)過程中具有穩(wěn)定的遺傳特性,對(duì)于發(fā)酵中或發(fā)酵結(jié)束后的收獲液,研制單位還要進(jìn)行細(xì)胞特性和基因序列的確認(rèn)。
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??目前,我國(guó)傳統(tǒng)的生物制品生產(chǎn)企業(yè)(如各大生物制品研究所)對(duì)于種子庫(kù)的管理是比較重視的,基本都建立了一套嚴(yán)格、規(guī)范的管理體系。但部分新建的生物制藥企業(yè)對(duì)此并未給予充分的重視,主要問題表現(xiàn)在缺少規(guī)范的管理體系、種子庫(kù)的檢測(cè)項(xiàng)目不全面及檢定方法不合理等。從企業(yè)的申報(bào)資料看,上游研究工作也往往在種子庫(kù)的建立和檢定方面存在問題,特別是關(guān)于真核表達(dá)體系,因其管理體系及技術(shù)方法較復(fù)雜,所以出現(xiàn)的問題也特別多,幾乎大部分的申報(bào)品種均需進(jìn)行此方面的補(bǔ)充研究。問題主要表現(xiàn)為:只建立一級(jí)種子庫(kù),檢定項(xiàng)目不全面,不按《中國(guó)生物制品規(guī)程》的要求進(jìn)行支原體和病毒的檢查等。
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??與國(guó)外相比,我國(guó)的現(xiàn)行技術(shù)要求也相對(duì)簡(jiǎn)單,而根據(jù)目前的現(xiàn)實(shí)情況及檢測(cè)項(xiàng)目本身的重要性,我們建議研究者可考慮在種子庫(kù)檢定中增加目的基因序列測(cè)定項(xiàng)目,并規(guī)定對(duì)保存在種子庫(kù)中的細(xì)胞進(jìn)行定期的重復(fù)檢定,每批從WCB中取出細(xì)胞投產(chǎn)前應(yīng)進(jìn)行必要的檢定,對(duì)于至少一批培養(yǎng)終止的收獲液應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞鑒定和基因序列確認(rèn)等。
??生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證值得重視
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??合理的生產(chǎn)工藝應(yīng)能最大可能地提高目的產(chǎn)物的得率及保證終產(chǎn)品的純度及活性,并可有效去除各種有害雜質(zhì)。目前生物技術(shù)藥物申報(bào)資料中的常見問題是工藝研究資料過于簡(jiǎn)單,即使提供了較詳細(xì)的資料,也主要是對(duì)工藝流程摸索及工藝參數(shù)篩選的描述,缺乏關(guān)于工藝驗(yàn)證研究方面的資料,而這與申報(bào)者進(jìn)行工藝研究的側(cè)重點(diǎn)及我們過去的審評(píng)思路都有關(guān)。一般情況下,申報(bào)單位只提供不同工藝或參數(shù)比較的資料或文獻(xiàn)資料,而對(duì)于工藝的提取及純化效果卻缺乏有效的驗(yàn)證,其實(shí)對(duì)于保證產(chǎn)品質(zhì)量而言,后者的工作應(yīng)更為重要。
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??國(guó)外一些生物制藥企業(yè)的做法值得我們借鑒,如在工藝研究階段,對(duì)每一步工藝去除外源雜質(zhì)(如宿主DNA或有機(jī)溶劑等)的效果進(jìn)行驗(yàn)證;在常規(guī)生產(chǎn)階段,對(duì)某些重要的處理步驟(如除菌工藝)進(jìn)行定期驗(yàn)證等。工藝驗(yàn)證的結(jié)果也將直接影響質(zhì)控項(xiàng)目的設(shè)定,如FDA建議,經(jīng)過工藝驗(yàn)證后,研制單位如能證實(shí)某些特定的步驟可有效地去除DNA,則在重組產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中可取消殘余宿主DNA檢測(cè)項(xiàng)目。因此我們提醒研發(fā)者,應(yīng)重視工藝效果的驗(yàn)證工作。