一、用帖壁法純化巨噬細(xì)胞

1．用含20％～40％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將巨噬細(xì)胞配成2×106～4×106/ml的濃度。以每平方厘米2×105～4×105個(gè)巨噬細(xì)胞的密度將細(xì)胞懸液接種到玻璃培養(yǎng)皿（瓶）或塑料培養(yǎng)皿（瓶）中。37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時(shí)或24小時(shí)。1小時(shí)培養(yǎng)節(jié)省時(shí)間但會(huì)丟失一些粘附力弱的巨噬細(xì)胞，而24小時(shí)可以得到較多的巨噬細(xì)胞。20％～40％的小牛血清可以減少B淋巴細(xì)胞的粘附。

2．搖晃培養(yǎng)皿（瓶），懸浮未粘附細(xì)胞，吸出細(xì)胞懸液。用預(yù)溫的Hanks液洗滌細(xì)胞3～4次。懸浮細(xì)胞可重復(fù)粘附，得到更多巨噬細(xì)胞。用適量含2.5mmol/L EDTA的無(wú)鈣鎂Hanks液消化細(xì)胞37℃ 15～30分鐘。用吸管吹打分離細(xì)胞，離心250×g 10分鐘，去上清液。

3．用預(yù)冷的Hanks液洗滌細(xì)胞3～4次，每次離心250×g 10分鐘，去上清液。最后用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞并決定細(xì)胞活力，將細(xì)胞配成所需的濃度。

二、用不連續(xù)密度梯度離心純化巨噬細(xì)胞

1．取15ml離心管，將制備好的各濃度密度梯度材料按下濃上淡的順序依次分層加在離心管中，每個(gè)濃度2ml。最后加上上述巨噬細(xì)胞懸液3～5ml（約含2×107～5×107細(xì)胞）。

2．4℃中，水平離心1000×g 30分鐘，垂直取出離心管，小心吸出各交界面的細(xì)胞。分別用預(yù)冷的含1％小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌各交界面細(xì)胞2次，每次200×g 10分鐘。用含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞配成所需的濃度。