1.培養(yǎng)IL-2依賴細胞株CTLL-2細胞或HT-2細胞(檢測IL-2),或者IL-3依賴細胞株FDC-P1細胞或FL5.12細胞(檢測IL-3)到對數(shù)生長期。
2.取96孔細胞培養(yǎng)板,每孔加0.1ml含1×104~2×104上述細胞之一的DMEM培養(yǎng)液(加10%小牛血清)。
3.每孔加0.1ml系列稀釋的待測細胞因子(IL-2或IL-3)樣品或細胞因子標準品,在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
4.每孔加20μl MTS/PMS混合液,繼續(xù)培養(yǎng)3~4小時顯色。
5.檢測前搖晃培養(yǎng)板10秒鐘,混勻顏色。在酶聯(lián)檢測儀上,波長570nm(或490nm,或570nm和690nm)處檢測各孔的光吸收值(OD)。用樣品稀釋度對OD值(OD570、OD490或OD570/OD690)繪制劑量-反應(yīng)曲線,根據(jù)標準品曲線計算樣品中細胞因子的量。