今年臺(tái)風(fēng)“蘇羅迪”后，福建長(zhǎng)樂(lè)對(duì)蝦發(fā)光病嚴(yán)重，筆者針對(duì)發(fā)光死蝦主要采用了病原分離、人工感染等方法，對(duì)熒光菌感染途徑進(jìn)行探究，并提出了初步的防治方法。

 

    對(duì)蝦發(fā)光病是一種在對(duì)蝦養(yǎng)殖中常見(jiàn)的細(xì)菌性疾病，它具有發(fā)病快、傳播廣、感染力強(qiáng)、致死率高、防治困難等特點(diǎn)，是對(duì)蝦養(yǎng)成期間危害較大的流行病之一。我國(guó)對(duì)蝦發(fā)光病主要發(fā)生于福建、廣東、廣西等沿海地區(qū)，主要危害凡納濱對(duì)蝦 (Penaeus vannamei) 和斑節(jié)對(duì)蝦 (Penaeus monodon)。目前的研究表明，引起對(duì)蝦發(fā)光病的病原有霍亂弧菌(V．cholerae) 、燦爛弧菌(V．splendidus) 、火神弧菌(V．logei) 、哈維氏弧菌(V．harveyi) 和費(fèi)氏弧菌(V．fischeri) 5 種，但其主要病因是哈維氏弧菌感染。

 

    今年臺(tái)風(fēng)“蘇羅迪”后，福建長(zhǎng)樂(lè)對(duì)蝦發(fā)光病嚴(yán)重，筆者針對(duì)發(fā)光死蝦主要采用了病原分離、人工感染等方法，對(duì)熒光菌感染途徑進(jìn)行探究，并提出了初步的防治方法。

 

一、研究方法

 

1、細(xì)菌分離

 

    將采自福建長(zhǎng)樂(lè)某養(yǎng)殖場(chǎng)已經(jīng)死亡的發(fā)光病蝦，體表用75%乙醇消毒后，用無(wú)菌解剖刀在超凈工作臺(tái)上切開(kāi)病蝦腹肌肉，用TSA和TCBS固體培養(yǎng)基對(duì)肌肉進(jìn)行細(xì)菌劃線(xiàn)分離，30℃培養(yǎng)24h后觀察菌落生長(zhǎng)情況。

 

    挑取TSA和TCBS培養(yǎng)基上的典型菌落，再次劃線(xiàn)純化后分別接種于含2% NaCl的TSB中，30℃振蕩培養(yǎng)10h，OD560測(cè)定細(xì)菌濃度，然后分別拌料投喂，每克飼料含細(xì)菌數(shù)量為106cfu，每組40尾，對(duì)照組直接投喂，將南美白對(duì)蝦放在藍(lán)色玻璃桶（0.3m3）中飼養(yǎng)。

 

2、人工感染

 

    將取自長(zhǎng)樂(lè)某養(yǎng)殖場(chǎng)的健康對(duì)蝦(體長(zhǎng)6-8cm)飼養(yǎng)于藍(lán)色玻璃鋼桶（0.3m3），養(yǎng)殖用水為沙濾水，鹽度30‰，水溫22-24℃，暫養(yǎng)4d，每組30尾蝦。

 

    （1） 投喂感染：將試驗(yàn)菌株的菌懸液（108cfu/mL）拌料制成試驗(yàn)對(duì)蝦做餌料,濃度分別為102cfu/g、104cfu/g、106cfu/g，飼養(yǎng)、觀察5天，記錄對(duì)蝦死亡情況及發(fā)病癥狀，并及時(shí)移去死蝦。

 

    （2）創(chuàng)傷浸泡感染：將經(jīng)活化的新鮮試驗(yàn)菌懸液 (108cfu/mL) 加入試驗(yàn)用藍(lán)色玻璃鋼桶內(nèi)，充氣攪拌使海水分別為102cfu/mL、104cfu/mL、106cfu/mL，然后用針頭在健康試驗(yàn)對(duì)蝦腹肌上刺扎，造成創(chuàng)傷后放入帶菌的海水中。

 

    （3）普通浸泡感染：方法同（2），不同的是不用將試驗(yàn)蝦刺扎，直接將其放入帶菌海水中。

 

 

嚴(yán)重感染（感染后第2、3天）：游動(dòng)緩慢、有明顯的胃炎、肝胰腺萎縮、體色明顯發(fā)紅

 

二、結(jié)果

 

1、分離與回歸感染

 

    從發(fā)病蝦苗體內(nèi)分離純化到3株優(yōu)勢(shì)菌A－1、A－2、A－3在TCBS培養(yǎng)基上顏色分別為綠色、 黃色、 黑色，在暗室只有A－1菌株發(fā)淡綠色熒光。經(jīng)回歸感染試驗(yàn)證實(shí)，A－1能引起南美白對(duì)蝦死亡且死蝦發(fā)光，其癥狀與自然發(fā)病成蝦的癥狀相同，而其他優(yōu)勢(shì)菌均不能使死蝦發(fā)光，因此證實(shí)該菌為對(duì)蝦發(fā)光的致病菌之一。

 

2、人工感染

 

    （1）投喂感染：拌料投喂感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明：對(duì)照組實(shí)驗(yàn)期間沒(méi)有發(fā)生死亡；102cfu/g組在第3天對(duì)蝦開(kāi)始死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，共死亡22尾，占73.3%；104cfu/g組在第2天開(kāi)始死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，共死亡29尾，占96.7%；而106cfu/g在第2天出現(xiàn)死亡，在第4天已全部死亡。由此可見(jiàn)，飼料中熒光菌數(shù)量與對(duì)蝦死亡速度呈正相關(guān)。

    （2）創(chuàng)傷浸浴感染：創(chuàng)傷浸浴感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明：對(duì)照組沒(méi)有發(fā)生死亡；102cfu/mL組在第4天開(kāi)始死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，共死亡20尾，占66.7%；104cfu/mL在第3天開(kāi)始死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，共死亡25尾，占83.3%；106cfu/mL組在第2天開(kāi)始死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，全部死亡。由此可見(jiàn)，水體中的熒光菌數(shù)量與對(duì)蝦死亡速度呈正相關(guān)。

    （3）普通浸浴感染：普通浸浴感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明：對(duì)照組、102cfu/mL組、104cfu/mL組均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)死亡；106cfu/mL組在第4天開(kāi)始死亡，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，共死亡2條，占6.7%。由此可見(jiàn)，健康對(duì)蝦在含熒光菌的海水中不易被感染。

三、討論

 

    投喂感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，即使飼料中含有少量的發(fā)光細(xì)菌，仍然可以在較短的時(shí)間里，使對(duì)蝦大量死亡，這說(shuō)明攝食感染是熒光菌感染健康對(duì)蝦最主要的感染方式。

 

    對(duì)蝦的捕捉搬運(yùn)、受驚嚇以及頻繁活動(dòng)，都有可能造成蝦體創(chuàng)傷，發(fā)光菌侵入蝦體后，利用機(jī)體組織作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行大量繁殖，并在熒光素酶的作用下使還原型熒光素氧化成氧化型熒光素，同時(shí)放出熒光，因而我們可見(jiàn)對(duì)蝦局部組織發(fā)白發(fā)光。大量繁殖的發(fā)光菌隨著蝦體的循環(huán)系統(tǒng)逐漸侵入到蝦體全身器官，遍布全身就使得蝦體全身死亡并發(fā)光。創(chuàng)傷感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)水體中的熒光菌含量在102cfu/mL，仍然會(huì)有超過(guò)60%的蝦發(fā)病死亡，這說(shuō)明創(chuàng)傷感染也是熒光菌感染健康對(duì)蝦的一種重要途徑。

 

    本研究中普通浸浴感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)熒光菌濃度濃度達(dá)到106cfu/mL，會(huì)導(dǎo)致少量對(duì)蝦死亡，而當(dāng)濃度低于104cfu/mL時(shí)，不會(huì)引起對(duì)蝦死亡，在高位池中熒光菌數(shù)量一般不會(huì)超過(guò)102cfu/mL，所以說(shuō)健康對(duì)蝦在含有熒光菌的蝦池較難感染發(fā)病，這說(shuō)明普通浸浴感染不是引起對(duì)蝦發(fā)光的主要途徑。

 

    因此，防治南美白對(duì)蝦成蝦發(fā)光病需從切斷攝食感染和創(chuàng)傷浸浴感染途徑著手。

 

    在高位池中，可先進(jìn)行消毒，后加芽孢桿菌、光合細(xì)菌，同時(shí)投喂優(yōu)質(zhì)飼料的方法來(lái)切斷這兩種主要的感染途徑。消毒的作用是殺死病蝦、弱蝦、蝦創(chuàng)傷部位的細(xì)菌和養(yǎng)殖環(huán)境中細(xì)菌，減少病原體的來(lái)源；消毒后及時(shí)撈起死蝦，避免攝食感染；加芽孢桿菌、光合細(xì)菌的作用是消毒導(dǎo)致養(yǎng)殖環(huán)境中細(xì)菌大量死亡，養(yǎng)殖水體的菌相處于“真空”狀態(tài)，添加有益細(xì)菌，能夠迅速占據(jù)有害細(xì)菌的生態(tài)位，使有害菌處于被抑制的狀態(tài)；投喂優(yōu)質(zhì)飼料的目的是提高養(yǎng)殖對(duì)蝦的健康程度，尤其是提高對(duì)蝦的免疫力，有效降低感染的概率。

 

作者：福建大北農(nóng)水產(chǎn)科技有限公司  黎東