(1)儀器已經(jīng)確認、校正并在有效期內(nèi)。
(2)經(jīng)過培訓的人員。
(3)可靠穩(wěn)定的對照品,標準樣品。
(4)可靠穩(wěn)定的實驗試劑。
(5)確認受試溶液的穩(wěn)定性,在規(guī)定時間內(nèi)無降解。
2.準確度
準確度是指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度,用百分回收率表示。
測定回收率R(recovery)的具體方法可采用加樣回收試驗法來進行測定。加樣回收試驗已準確測定樣品含量P的真實樣品+已知量A的對照品(或標準品)測定,測定值為M。
數(shù)據(jù)要求:規(guī)定的范圍內(nèi),至少用9次測定結果評價,如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。
3.精密度
重復性、中間精密度和重現(xiàn)性精密度是指在規(guī)定條件下,同一個均勻樣品,經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。用偏差(d)、標準偏差(SD)、相對標準偏差(RSD)(變異系數(shù),CV)表示。
(1)重復性(repeatability):在相同條件下,由同一個分析人員測定所得結果的精密度;在規(guī)定的范圍內(nèi),至少用9次測定結果評價,如制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當作100%,至少測6次進行評價。
(2)中間精密度:同一實驗室,不同時間由不同分析人員用不同設備所得結果的精密度。
(3)重現(xiàn)性(reproducibility):不同實驗室,不同分析人員測定結果的精密度。
(4)數(shù)據(jù)要求:需報告SD,RSD和可信限。
4.專屬性
指有其他成分(雜質(zhì)、降解物、輔料等)可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性,能反映該方法在有共存物時對供試物準確而專屬的測定能力,是指該法用于復雜樣品分析時是否受到相互干擾程度的度量。
•通常通過分析含有加了雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、有關化學物質(zhì)或安慰劑成分的樣品,將所獲分析結果與未加前述成分之樣品的測試結果進行比較,兩組測試結果之差即專屬性。
•鑒別反應---應能與可能共存的物質(zhì)或結構相似化合物區(qū)別,不含被分析的樣品,以及結構相似或組分中的有關化合物,均應呈負反應。
•含量測定和雜質(zhì)測定---色譜法和其他方法,應附代表性圖譜,亦說明專屬性;圖中應標明各組份的位置,色譜法中的分離度應符合要求。
•雜質(zhì)可獲得的情況下,對于含量測定,試樣中可加入雜質(zhì)或輔料,考察測試結果是否受干擾;對于雜質(zhì)測定,也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì),考察雜質(zhì)間是否得到分離。
5.檢測限
檢測限系指試樣在確定的實驗條件下,被測物能被檢測出的最低濃度或含量;它是限度檢驗效能指標,無需定量測定,只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可
•非儀器分析目視法:
用已知濃度的被測物,試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量
•信噪比法:
用于能顯示基線噪音的分析方法(儀器分析方法),是把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較,算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量;一般以信噪比3∶1或2∶1時的相應濃度或注入儀器的量確定檢測限
•標準差法:
空白值=0時;①測定背景10次以上,求出標準差σ;②將σ乘以三倍;③在工作曲線上求出3σ相對應的濃度X,即為方法的檢出值。
空白值不等于0時①測定背景10次以上,求出標準差σ;②將σ乘以三倍;③在工作曲線上求出3σ相對應的濃度X;④將求得的對應濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。
6.定量限
•指樣品中被測物能被定量測定的最低量,結果應具有一定準確度和精密度要求
•常用信噪比法確定定量限,一般以信噪比(S/N)為10∶1時相應的濃度或注入儀器的量進行確定,也可用儀器所測空白背景響應標準差(SD)的10倍為估計值,再經(jīng)試驗確定方法的實際測定下限。
7.線性
在設計的范圍內(nèi),測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。線形通常用最小二乘法處理數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率(Slope)來表示。數(shù)據(jù)要求:至少需要五個濃度考察線形,需提供相關系數(shù)、y截距(是檢定的可能偏差)、回歸斜率及方差等參數(shù),應列出回歸方程數(shù)和線性圖。
注意:做線性時,應注意盡量做的點多一點、線性濃度范圍寬一點,這樣做的好處是:當你在準確度考察時,你做的回收率考察的濃度就大些,配制溶液時就容易操作些;否則,在你做線性考察時,你做的線性濃度范圍不寬,那么你在考察回收率時,你采用加入法考察時的濃度變化范圍就不寬,操作濃度很難控制,造成實際操作困難。
8.范圍
指達到一定精密度、準確度和線性的條件下,測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。范圍應根據(jù)分析方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果和要求確定。
藥物分析為例:
•原料藥和制劑含量測定范圍為80%-120%;制劑含量均勻度范圍為70%-130%;雜質(zhì)測定應為被測雜質(zhì)匯報值到限度的120%;溶出度應為測定范圍的±20%,如規(guī)定了限度范圍,應為下限的-20%至上限的+20%,例如緩釋片1h<20%,7h>70%,則驗證范圍定為0-90%。
9.耐用性
指測定條件稍有變動時,結果不受影響的承受程度,為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。是衡量實驗室和工作人員之間在正常情況下實驗結果重現(xiàn)性的尺度;如果方法易受到分析條件的影響,或要求苛刻,應注明。
典型的變動包括:分析溶液的穩(wěn)定性,提取時間等實驗條件。
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