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      實驗室常用緩沖液、試劑的配制方法

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-04-15  來源:生物秀
      核心提示:#1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)#組份濃度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約80
       #1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)#
      組份濃度:1 M Tris-HCl
      配制量:1 L
      配制方法:
      1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。
      2. 加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。
      3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。
      4. 將溶液定容至1 L。
      5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
      注意:應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。
       
       
       
      #10&timeTE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)#
      組份濃度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA
      配制量:1 L
      配制方法:
      1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。
      2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,均勻混合。
      3. 將溶液定容至1 L后,高溫高壓滅菌。
      4. 室溫保存。
       
      #1.5 M Tris-HCl (pH8.8)#
      組份濃度:1.5 M Tris-HCl
      配制量:1 L
      配制方法:
      1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。
      2. 加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。
      3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。
      4. 將溶液定容至1 L。
      5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
      注意:應使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個單位。
       
      #3 M 醋酸鈉(pH5.2)#
      組份濃度:3M 醋酸鈉
      配制量:100ml
      配制方法:
      1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中,加入月40ml的去離子水攪拌溶解
      2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2
      3.加去離子水將溶液定容至100ml
      4高溫高壓滅菌后,室溫保存。
       
       
      #Buffer#
      組份濃度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4
      配制量:1 L
      配制方法:
      1. 稱量下列試劑,置于1 L燒杯中。
      2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。
      3. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 L。
      4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。
      注意:上述 Buffer中無二價陽離子,如需要,可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
       
       
      #10 M 醋酸銨#
      組份濃度:10 M 醋酸銨
      配制量:100 ml
      配制方法:
      1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100~200 ml燒杯中,加入約30 ml的去離子水攪拌溶解。
      2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
      3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。
      4. 密封瓶口于室溫保存。
      注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。
       
       
      #Tris-HCl平衡苯酚#
      配制方法:
      1. 使用原料:大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的,無需重蒸餾便可用于分子生物學實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色,應避免使用。同時也應避免使用結(jié)晶苯酚,結(jié)晶苯酚必須在160℃對其進行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物,這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此,苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要,我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進行分子生物學實驗。
       
      2. 操作注意:苯酚腐蝕性極強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡等。所有操作均應在通風櫥中進行,與苯酚接觸過的皮膚部位應用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。
       
      3. 苯酚平衡:因為在酸性pH條件下DNA分配于有機相,因此使用苯酚前必須對苯酚進行平衡使其pH值達到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
      ① 液化苯酚應貯存于-20℃,此時的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達到室溫,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
      ② 加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度0.1%。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時因其呈黃色,有助于方便識別有機相。
      ③ 加入等體積的1 M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
      ④ 重復操作步驟③。
      ⑤ 加入等體積的0.1 M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。
      ⑥ 重復操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。
      ⑦ 使用pH試紙確認有機相的pH值大于7.8。
      ⑧ 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
      苯酚/氯仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)
      配制方法:
      1. 說明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。
      2. 配制方法:將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24 : 1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。
       
       
      #10% (W/V) SDS#
      組份濃度:10% (W/V)SDS
      配制量:100ml
      配制方法:
      1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水,68℃加入溶解
      2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2
      3.將溶液定容至100ml后,室溫保存。
       
      #2 N NaOH#
      組份濃度:2 N NaOH
      配制量:100 ml
      配制方法:
      1. 量取80 ml去離子水置于100~200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。
      2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。
      3. 待NaOH完全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100 ml。
      4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。
       
      #2.5 N HCl#
      組份濃度:2.5 N HCl
      配制量:100 ml
      配制方法:
      1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸(11.6 N),均勻混合。
      2. 室溫保存。
       
       
      #5 M NaCl#
      組份濃度:5 M NaCl
      配制量:1 L
      配制方法:
      1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中,加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。
      2. 加去離子水將溶液定容至1 L后,適量分成小份。
      3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
       
      #20% (W/V) Glucose#
      組份濃度:20% (W/V) Glucose
      配制量:100 ml
      配制方法:
      1. 稱取20 g Glucose置于100~200 ml燒杯中,加入約80 ml的去離子水后,攪拌溶解。
      2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。
      3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
       
      #Solution I(質(zhì)粒提取用)#
      組份濃度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose
      配制量:1 L
      配制方法:
      1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。
      2. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
      3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。
       
       
      #Solution II(質(zhì)粒提取用)#
      組份濃度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS
      配制量:500ml
      配制方法:
      1.量取下列溶液,置于500ml燒杯中
      10% SD 50ml
      2N NaOH50ml
      2.加滅菌水定容至500ml,充分混勻
      3.室溫保存,此溶液保存時間最好不要超過一個月
      注意:SDS易產(chǎn)生氣泡,不要劇烈攪拌
       
      #Solution III(質(zhì)粒提取用)#
      組份濃度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH
      配制量:500 ml
      配制方法:
      1. 稱量下列試劑,置于500 ml燒杯中。
      2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。
      3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。
      4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。
       
      #0.5 M EDTA(pH8.0)#
      組份濃度:0.5 M EDTA
      配制量:1 L
      配制方法:
      1. 稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L燒杯中。
      2. 加入約800 ml的去離子水,充分攪拌。
      3. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20 g NaOH)。
      注意:pH值至8.0時,EDTA才能完全溶解。
      4. 加去離子水將溶液定容至1 L。
      5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。
      6. 室溫保存。
       
      #1 M DTT#
      組份濃度:1 M DTT
      配制量:20 ml
      配制方法:
      1. 稱取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
      2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。
      3. 適量分成小份后,-20℃保存。
       
      #10 mM ATP#
      組份濃度:10 mM ATP
      配制量:20 ml
      配制方法:
      1. 稱取121 mg Na2ATmiddot;3H2O,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。
      2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。
      3. 適量分成小份后,-20℃保存。
      編輯:songjiajie2010

       
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