利用超靈敏UPLC®-MS/MS對肌肉組織中的低濃度保泰松進行快速檢測和定量。

 

近來調查結果顯示，在歐洲的牛肉制品中發(fā)現(xiàn)未經申報的馬肉，這一事件的發(fā)生迫切要求相關企業(yè)和監(jiān)管機構對肉類和肉制品中存在的馬肉組織和殘留的非甾體抗炎藥（NSAID）保泰松（PBZ）進行分析檢測。保泰松是一種獸藥，在一些歐盟成員國，這種藥用于為非食品用途的動物（狗和馬）緩解疼痛和減輕炎癥。但是，這種藥物被規(guī)定不得用于治療參與人類食物鏈的動物。因此，任何動物源性食品中存在此物質通常是由于非法使用經過治療的馬尸體所導致的。

 

 

本研究引用了一種已報道的從肌肉組織中提取保泰松的方法1，并對該方法做了較小調整。簡單來講，即取肉勻漿2 g，加入乙腈10 mL，振搖2 min。離心后，收集上清液并用水進行稀釋。使用沃特世（Waters®） Oasis®HLB 60 mg，將第一步所得的稀釋提取物進行固相萃取(SPE)。用甲醇洗脫保泰松，然后用含10 mM甲酸銨(pH 3.2)的水進行稀釋。在進行固相提取及上樣之前，對提取物分別進行稀釋，這樣，無需進行蒸發(fā)和復溶操作。取100μL稀釋上樣液，注入LC-MS/MS系統(tǒng)進行分析。

 

選擇并優(yōu)化了兩個多重反應監(jiān)測（MRM）離子對（定量和確證）對保泰松進行分析。所得結果已添加到QuanpediaTM數(shù)據(jù)庫以便將來使用。在本應用中，色譜分析采用2.1×100 mm HSS T3分析型色譜柱(1.7μm)，以甲醇/水（10mM甲酸銨，pH 3.2)進行梯度洗脫，梯度時間為5 min。圖1顯示了200 ng/kg保泰松加標提取物的MRM色譜圖。如圖1所示，保泰松和內標（100 ng/kg）的信噪比高，峰形良好。校正回收率后的工作標準曲線如圖2所示，制備基質加標樣品兩份，并進行提取，建立六點校準曲線。根據(jù)線性回歸，計算校準曲線（1/x2加權），以保泰松-二苯基13C12作為內標。由結果數(shù)據(jù)可知，可輕松達到最低校準點(10 ng/kg)，比歐盟建議的濃度（RC)5μg/kg低500倍。在整個檢測濃度范圍內（10-500ng/kg），線性良好（R2 0.997）。在處理肉制品的過程中，馬肉可能以其它途徑摻入其中，保泰松濃度水平可能遠低于EU RC，因此檢測靈敏度是一個重要的考慮因素。

 

ACQUITY UPLC®I-Class系統(tǒng)與Xevo®TQ-S聯(lián)用，并結合Waters ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱可對肉中濃度低至10 ng/ kg的保泰松進行分析。即使對于濃度可能很低的經混合和經處理的肉制品，這種超靈敏的UPLC-MS/MS技術仍能確保成功檢出受污染產品。

 

1. N. Van Hoof, K. De Wasch, S. Poelmans, H. Noppe and H. De Brabander Rapid Commun. Mass Spectrom. 2004; 18: 2823–2829