“賽默飛之生物通2012實驗室創(chuàng)新技術大獎”評選活動開展以來，生物通已經陸陸續(xù)續(xù)收到不少項目，這些項目中有的能減少實驗步驟，有的能降低實驗成本，還有一些改進了實驗設備，讓我們的實驗過程更加輕松。

 

參選項目：一種簡單快速的miRNA檢測新方法----液相雜交顯色法

 

背景：MicroRNAs(miRNAs)是近年來發(fā)現的在進化上高度保守的一類非編碼小RNA(~22nt)。它作為轉錄后關鍵的基因表達調控子可參與幾乎所有的生理和病理過程，革新了我們對基因表達調控的傳統認識。miRNAs的檢測是其功能研究的基礎，但小片段的特性使其檢測十分困難。

 

PCR和Northernblot是目前檢測單個miRNA最廣泛使用的兩種方法。PCR方法敏感性高，但假陽性的憂慮和引物設計的困難限制了它的使用。Northernblot是非常有效的檢測工具，但傳統的固相雜交技術程序復雜、時間漫長且操作不便。新出現的液相雜交技術檢測速度快，但需要特定的熒光信號檢測儀器。

 

方法改進：我們這里報道一種新的miRNA檢測方法：液相雜交顯色法(LHCD)。

 

這種方法是將提取純化的小RNA與5’端生物素標記的DNA探針進行液相雜交，接著用核酸外切酶消化多余的探針，再將雜交液點于尼龍膜上，之后ABC孵育，最后BCIP/NBP、DAB或者ECL顯色。

 

LHCD能夠區(qū)別miRNA家族成員間一個堿基的差異，其靈敏度可以達到2.5fmol，全過程耗時不到3個小時。本方法由于整合了快速液相雜交和親和素-生物素信號放大系統(ABC)兩大技術，不但實現了miRNA的簡單、快速、高靈敏度檢測，其可視化的信號目測，還省去了昂貴的信號檢測儀。此外，本方法簡單的操作流程，使其容易學習和方便使用。