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      藥品檢測中的內毒素的檢測方法及意義

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-04-19  來源:網絡
      核心提示:01什么是內毒素?細菌內毒素,又稱為“熱原”,細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的特有結構,細菌在存活狀態(tài)時不釋放出來,只有

      01什么是內毒素?

      細菌內毒素,又稱為“熱原”,細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的特有結構,細菌在存活狀態(tài)時不釋放出來,只有當細菌死亡自溶時才釋放到細胞外,表現多種毒性作用,為區(qū)別于外毒素而稱之為內毒素。細菌內毒素是由脂多糖(LPS)、蛋白質和磷脂組成的高分子量復合物,發(fā)揮毒性的成分主要為類脂質A(Lipid A),類脂A是LPS活性不可缺少的部分, 可視作LPS 的“生物活性中心”。內毒素位于細胞壁的最外層、覆蓋于細胞壁的黏肽上。各種細菌的內毒素的毒性作用較弱,大致相同,可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內毒素休克及播散性血管內凝血等。內毒素耐熱而穩(wěn)定,抗原性弱?纱碳C體產生抗體,但無中和作用,形成抗毒素,經甲醛處理不能成為類毒素。

      02內毒素的檢測方法有哪些?

      20世紀60年代,人們發(fā)現一種古老的海洋生物,被稱為“海洋活化石”的鱟,它的血液與內毒素接觸后會發(fā)生特異性的凝集反應,人們經過大量研究和實驗從它的血液中提取出了用于檢測內毒素的“鱟試劑”。內毒素檢測單位為EU/ml。

      目前內毒素測定方法有:

      ① 凝膠法,將樣本與鱟試劑在試管中混合,并使用干浴器,在37±1°C下,孵育60±2min,期間不要振動。加熱完成后,立即緩慢地將試管傾斜180°。如果凝膠已形成并能保持其完整性而不變形或塌陷,則結果可確定為陽性,而如果未形成凝膠則為陰性。在檢測期間,對于一系列樣本,要進行多倍稀釋(通常為2倍),以檢查每個樣品的結果是否為陽性。確定為陽性的最大有效稀釋倍數或最小濃度被稱為終點。

      ② 脂多糖(LPS)的生物學標記的探測分析法,雖然此類方法能夠檢測出樣品中LPS的種類并且能敏感地檢測出樣品中LPS的濃度,但是仍然不能準確地檢測出有生物學作用的內毒素濃度。

      ③ 酶聯免疫測定法(ELISA),ELISA法是目前新興的內毒素檢測方法, 它是基于抗原抗體的酶聯免疫測定法,由外加熱原質刺激巨噬細胞后產生的內熱原物質如腫瘤壞死(TNF)因子白細胞介素1(IL-1)等而進行測定的。

      ④ 生物傳感器檢測法,生物傳感器也是目前新興的內毒素檢測方法,大部分仍是基于鱟試驗法中鱟阿米巴法溶解產物與內毒素的LPS地凝結反應。該類檢測法具有測量速度快、敏感性高、最低檢測限低等特點,目前,國內外有較多對生物傳感器檢測內毒素的研究。

      03內毒素檢測的意義有哪些?

      細菌內毒素具有多種生物學活性,微量的內毒素進入機體將會出現發(fā)熱、血壓降低、寒顫、引起DIC、內毒素敗血癥等一系列臨床反應,因此內毒素快速定量檢測,對臨床對癥治療具有很深的現實意義。

      ① 內毒素檢測不僅有助于鑒別是否為細菌感染,尤其是對于革蘭陰性桿菌感染具有重要的參考價值,還能提示感染嚴重程度,可用于發(fā)熱原因的快速輔助診斷。

      ② 有利于臨床及早診治疾病,為選擇用藥提供一定理論依據,對病情進行動態(tài)監(jiān)測,對給藥后的療效及預后判斷具有重大意義。

      ③ 用于血液透析液的監(jiān)測,對于保證治療效果和患者安全有著重要作用。

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      編輯:songjiajie2010

       
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