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      血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-09-25  來(lái)源:實(shí)驗(yàn)室資訊網(wǎng)
      核心提示:原 理將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進(jìn)行預(yù)染。再將預(yù)染過(guò)的血清置于瓊脂糖凝膠板上進(jìn)行電泳分離。通電后,脂蛋白向
      原 理
       
      將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進(jìn)行預(yù)染。再將預(yù)染過(guò)的血清置于瓊脂糖凝膠板上進(jìn)行電泳分離。通電后,脂蛋白向正極移動(dòng),并分離為幾個(gè)區(qū)帶。
       
      操 作
       
      1.預(yù)染血清:血清0.2ml加蘇丹黑染色液0.2ml于小試管中,混合后置37℃水浴染色30分鐘,然后離心(2000轉(zhuǎn)/分,約5分鐘)。
       
      2.制備瓊脂糖凝膠板:將已配制的0.45%瓊脂糖凝膠于沸水浴中加熱融化,用吸管吸取凝膠溶液澆注載玻片,每片2.5ml,靜置約半小時(shí)后凝固(天熱時(shí)需延長(zhǎng),可放冰箱數(shù)分鐘加速凝固)。
       
      3.點(diǎn)加血清:已凝固的瓊脂糖凝膠板的一端約2cm處,用切口刀片垂直切入凝膠后立即取出,然后用銅絲小匙將長(zhǎng)方小條凝膠取出。以小片濾紙吸干小槽中水分,用血色素吸管吸取經(jīng)過(guò)預(yù)染的血清約15μl,注入凝膠板上的小槽內(nèi)。
       
      4.電泳:將加過(guò)血清的凝膠板平行放入電泳槽中,樣品應(yīng)在陰極一端。兩塊三層紗布于巴比妥緩沖液中浸潤(rùn),然后輕輕緊密貼在凝膠板兩端,紗布的另一端浸于電泳槽內(nèi)的巴比妥緩沖液(注意:此電極緩沖液不能用三羥甲烷緩沖液代替)。接通電源,電壓為120~130V,每片電流為3~4mA。約經(jīng)電泳15至55分鐘,即可見(jiàn)分離之色帶。
       
      結(jié)果及臨床意義
       
      1.正常人血清脂蛋白可出現(xiàn)三條區(qū)帶,從負(fù)極到正極依次為β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最淺)、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些),在原點(diǎn)處應(yīng)無(wú)乳糜微粒。
       
      2.如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深,結(jié)合血清甘油三酯明顯升高和膽固醇正�;蚵愿�,可以定為Ⅳ型高脂蛋白血癥。
       
      3.如果β-脂蛋白區(qū)帶比正常血清明顯深染者,同時(shí)結(jié)合血清總膽固醇明顯增高、甘油三酯正常者為Ⅱa型;若結(jié)合血清總膽固醇增高而甘油三酯略高的前β略溶者為Ⅱb型。
       
      4.結(jié)果β-和前β-兩區(qū)帶分離不開(kāi)連在一起稱“寬β區(qū)帶”,結(jié)合血清甘油三酯和膽固醇均有所增高,可定為Ⅲ型。
       
      5.如果原點(diǎn)出現(xiàn)乳糜微粒,β,前β均正�;驕p低,結(jié)合血清甘油三酯明顯升高,可定為Ⅰ型。
       
      注意事項(xiàng)
       
      1.電泳樣品要求為新鮮的空腹血清。
       
      2.每一塊凝膠上可平行挖兩條小槽,因而可加兩個(gè)樣品。
       
      3.如果用一形狀大小和小槽一樣的有機(jī)玻璃片,在瓊脂糖膠凝固前固定于適當(dāng)位子上,當(dāng)凝固后取出有機(jī)玻璃片,凝膠板上留下小槽可直接加樣,不需挖槽。
       
      4.如果需要保留電泳樣本,可將電泳后之凝膠板(連同玻片)放于清水中浸泡脫鹽2小時(shí),然后放烘箱(80℃左右)烘干即可。
       
      試劑與器材
       
      1.巴比緩沖液(pH8.6,離子強(qiáng)度0.075):為電極緩沖液
       
      巴比妥鈉15.4g,巴比妥2.76g,EDTA酸0.292g,加水溶解后加水至1000ml
       
      2.三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH8.6)為凝膠緩沖液
       
      三甲基氨基甲烷1.212g,EDTA酸0.29g,NaCl 15.85g加水溶解后加水至1000ml
       
      3.瓊脂糖凝膠
       
      瓊脂糖0.45g,三痙甲基氨基甲烷緩沖液50ml,水50ml
       
      加熱至沸,待瓊脂糖溶解后立即停止加熱。
       
      4.挖槽工具制作
       
      切口刀:刀口長(zhǎng)15mm的刀片,中央夾一有機(jī)玻璃或木片,用螺絲固定,使兩刀片相距1.5mm。挖槽小匙:用直徑1.5mm的銅絲約6cm長(zhǎng),一端錘成扁平,用砂紙磨光。
      5.電泳槽和電泳儀:同血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的儀器。
      編輯:songjiajie2010

       
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      關(guān)鍵詞: 血清脂蛋白 瓊脂糖 凝膠電泳
       

       
       
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