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      鞭毛染色法及活細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-06-28  來(lái)源:生物無(wú)憂
      核心提示:實(shí)驗(yàn)原理 鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官,一般細(xì)菌的鞭毛都非常纖細(xì),其直徑為0.010.02m,在普通光學(xué)顯微鏡的分辨力限度以外,故需要用特
       實(shí)驗(yàn)原理
          鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)“器官”,一般細(xì)菌的鞭毛都非常纖細(xì),其直徑為0.01—0.02μm,在普通光學(xué)顯微鏡的分辨力限度以外,故需要用特殊的鞭毛染色法,才能看到。鞭毛染色是借媒染劑和染色劑的沉淀作用,使染料堆積在鞭毛上,以加粗鞭毛的直徑,同時(shí)使鞭毛著色,在普通光學(xué)顯微鏡下能夠看到。
          在顯微鏡下觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性,也可以初步判斷細(xì)菌是否有鞭毛。通常使用壓滴法或懸滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。觀察時(shí),要適當(dāng)減弱光線,增加反差,如果光線很強(qiáng),細(xì)菌和周圍的液體就難以辨別。
      主要試劑
          鞭毛染色液,萬(wàn)分之一的美藍(lán)水溶液,凡士林,無(wú)菌水。
      主要設(shè)備
      載玻片,凹玻片,蓋玻片,酒精燈,顯微鏡等
      實(shí)驗(yàn)材料
      蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis),假單胞菌(Pseudomonas sp.),金黃色葡萄球菌。
      實(shí)驗(yàn)步驟
      1.鞭毛染色
         1) 菌種用新培養(yǎng)的菌種為宜,如所用菌種已長(zhǎng)期未移種,則用新制備的斜面連續(xù)移種2—3次后再使用。最好是將經(jīng)活化的菌種接種到新制備的瓊脂斜面或半固體培養(yǎng)基平皿上,培養(yǎng)10小時(shí)左右,備用。
         2) 制片在載玻片的一端滴一滴蒸餾水,用接種環(huán)挑取少許備用的菌苔,最好從菌落的邊緣取菌苔,注意不要挑上培養(yǎng)基,在載玻片的水滴中輕沾幾下。將載玻片稍傾斜,使菌液隨水滴緩慢流到另一端,然后平放在空氣中干燥。
         3) 染色涂片干燥后滴加A液染3—5分鐘,用蒸餾水沖洗,或?qū)埶疄r干或用B液沖去殘水(注意:一定要充分洗凈A液后再加B液,否則背景很臟)。洗凈A液滴加B液后,將玻片在酒精燈上稍加熱,使其微冒蒸汽且不干,一般染30—60秒鐘。然后用蒸餾水沖洗,自然干燥。
         4) 鏡檢鏡檢時(shí),如未見鞭毛,應(yīng)在整個(gè)涂片上多找?guī)讉(gè)視野,有時(shí)只在部分涂片上染出鞭毛。菌體為深褐色,鞭毛為褐色。
      細(xì)菌鞭毛染色要求非常小心細(xì)致,染色成功的關(guān)鍵主要決定于:
            a. 菌種活化的情況,即要連續(xù)移種幾次;
            b. 菌齡要合適,一般在幼齡時(shí)鞭毛情況最好,易于染色;
            c. 新鮮的染色液;
            d. 載玻片要求干凈無(wú)油污。
      鞭毛染色所用載玻片的清洗方法如下:
          選擇光滑無(wú)傷痕的玻片。先用洗衣粉煮沸,洗衣粉最好在洗玻片前加蒸餾水煮沸,用濾紙過(guò)濾去渣。為了避免玻片彼此磨損,最好把載玻片放在特制的架上煮,煮畢稍冷卻后取出,用清水洗凈,再放入濃洗液中浸泡24小時(shí)左右,取出用清水沖洗殘酸,最后用蒸餾水洗凈,瀝干水并放于95%乙醇中脫水,取出玻片,用火焰燒去酒精,立即使用。如不立刻使用,可存放于干凈的盒中或50%乙醇中短期存放。由于空氣中常常漂浮油污,最好立即使用。在洗凈的玻片上滴上水滴后應(yīng)能均勻散開。
      2.運(yùn)動(dòng)性觀察
         1) 壓滴法
            a. 分別將5ml無(wú)菌水倒入蘇云金芽孢桿菌、假單胞菌和金黃色葡萄球菌的斜面培養(yǎng)物內(nèi),制成菌懸液。各取出1ml菌液稀釋至肉眼看不到混濁為止。
            b. 各取2—3環(huán)三種稀釋菌液,分別放在三片清潔的載玻片中央,再各放一環(huán)萬(wàn)分之一的美藍(lán)水溶液混勻。
            c. 用鑷子夾一潔凈的蓋玻片,使其一邊先接觸菌液,然后將整個(gè)蓋玻片慢慢放下,注意不要產(chǎn)生氣泡。按此法分別將蓋玻片覆蓋于三種菌液上。
            d. 先以低倍鏡找到標(biāo)本,再用高倍鏡觀察,觀察時(shí)光線要調(diào)得暗些。
         2) 懸滴法
            a. 在潔凈蓋玻片周圍涂少許凡士林。
            b. 在蓋玻片中央滴一小滴菌液,或用接種環(huán)取1—2環(huán)菌液置于中央。
            c. 將凹玻片反轉(zhuǎn),使凹窩中心對(duì)準(zhǔn)蓋玻片上的菌液滴,液滴不得與凹玻片接觸,以接種環(huán)柄輕壓使蓋玻片與凹玻片粘在一起,液滴處于封閉的小室中,防止液滴干燥和氣流的影響。
            d. 小心將凹玻片翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái),使菌滴仍懸浮在蓋玻片下和凹窩中心(圖Ⅳ-3)。
            e. 先用低倍鏡找到懸滴邊緣,再用高倍鏡觀察。觀察時(shí)光線要調(diào)得暗一些。
          用懸滴法分別觀察蘇云金芽孢桿菌、假單胞菌和金黃色葡萄球菌的運(yùn)動(dòng)性。細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)有一定的前進(jìn)方向,并可轉(zhuǎn)彎,極生單鞭毛菌類多為直線運(yùn)動(dòng),周生鞭毛菌類多作波浪式運(yùn)動(dòng)。
      編輯:songjiajie2010

       
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