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一、概況
腸出血性大腸桿菌（EHEC）是能引起人的出血性腹瀉和腸炎的一群大腸埃希氏菌。以O(shè)157:H7血清型為代表菌株。
腸出血性大腸桿菌感染可引起輕度腹瀉、出血性結(jié)腸炎（HC）、溶血性尿毒綜合癥（HUS），血栓性血小板減少性紫癜（TTP）等。其中HUS病程兇險(xiǎn)，易造成急性腎衰竭乃至死亡。
1982年美國首次報(bào)道了由EHEC O157:H7引起的出血性腸炎暴發(fā)。此后，世界各地陸續(xù)報(bào)道了該菌引起的感染，并有上升趨勢。1996年在日本發(fā)生的EHEC O157:H7的暴發(fā)流行，引起出血性腹瀉，先后波及30多個(gè)都、府、縣，感染近萬人，并造成12人死亡，引起了全世界的關(guān)注。此外，美國、加拿大、瑞典、澳大利亞、英國的蘇格蘭和威爾士等國家和地區(qū)也相繼報(bào)道了EHEC的散發(fā)性感染和暴發(fā)流行。日本、加拿大及瑞士等國已將EHEC O157:H7列為必須報(bào)告的傳染病，予以高度重視。我國于1988年首次分離到EHEC O157:H7，從已有的流行病調(diào)查資料來看，我國亦存在EHEC的散發(fā)病例，但尚未有暴發(fā)流行的報(bào)道。
二、流行病學(xué)
EHEC O157:H7引起的感染有明顯的季節(jié)性，多發(fā)生于夏秋兩季，7-8月為發(fā)病高峰。在地區(qū)分布上，多發(fā)生于發(fā)達(dá)國家，主要以散發(fā)性感染為主。在年齡分布上，兒童與老年人的發(fā)病率明顯高于其他年齡組，且并發(fā)HUS和TTP的機(jī)率較高。最易分離到 O157:H7的年齡為5-9歲（0.9%）和50-59歲（0.89%）。農(nóng)場動物，尤其是反芻動物，構(gòu)成EHEC O157:H7在世界范圍內(nèi)的主要貯存宿主。O157:H7在牛中的流行報(bào)告范圍為0.1-16%；羊、豬、雞、馬、鹿、鴿子、海鷗等動物均可能為EHEC的攜帶者。EHEC的感染可形成直接傳播（動物→人，人→人），也可以通過間接傳播（食物、水源→人）。食源性的EHEC感染中，牛肉、生奶、雞肉及其制品，蔬菜、水果及其制品等均可能受其污染。其中， 牛肉是最主要的傳播載體。
EHEC O157:H7的感染劑量極低。潛伏期為3-10天，病程2-9天。通常是突然發(fā)生劇烈腹痛和水樣腹瀉，數(shù)天后出現(xiàn)出血性腹瀉，可發(fā)熱或不發(fā)熱。部分患者可發(fā)展為HUS、TTP等， 嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。
三、生物學(xué)特征
EHEC O157:H7屬于腸桿菌科埃希氏菌屬。革蘭氏染色陰性，無芽胞，有鞭毛，動力試驗(yàn)呈陽性。其鞭毛抗原可丟失，動力試驗(yàn)陰性，即O157:NM。EHEC O157:H7具有較強(qiáng)的耐酸性，pH2.5-3.0，37℃可耐受5小時(shí)；耐低溫，能在冰箱內(nèi)長期生存；在自然界的水中可存活數(shù)周至數(shù)月；不耐熱，75℃ 1分鐘即被滅活；對氯敏感，被1mg/L的余氯濃度殺滅。EHEC 的最適生長溫度為33-42℃，37℃繁殖迅速，44-45℃生長不良，45.5℃停止生長。
EHEC O157:H7除不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵山梨醇外，其他常見的生化特征與大腸埃希氏菌 基本相似，但也有某些生化反應(yīng)不完全一致，具有鑒別意義（詳見表2）。EHEC O157:H7雖然有uidA基因，但其編碼的β-葡萄糖醛酸酶無活性，不能分解4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）產(chǎn)生熒光，即MUG陰性。
EHEC除其代表菌株O157:H7外，還包括O157:NM、O26:H11、O111:H8、O125:NM、O121:H19、O45:H2、O4:NM、O145:NM、O5:NM、O91:H21、O103:H2、O113:H2等血清型的部分菌株。血清學(xué)鑒定包括O抗原和H抗原的鑒定。前者可使用玻片凝集試驗(yàn)或膠乳凝集試驗(yàn)；后者則應(yīng)先進(jìn)行動力試驗(yàn)，動力活潑者再進(jìn)行玻片和試管凝集試驗(yàn)。
EHEC O157:H7的另一個(gè)顯著特征是可產(chǎn)生大量的Vero毒素（VT），也稱作類志賀氏毒素（SLT），是EHEC的主要致病因子。Vero毒素按免疫原性等方面的不同可分為VT1和VT2。該毒素有一個(gè)A亞單位和5~6個(gè)B亞單位組成。B亞單位與宿主腸壁細(xì)胞糖脂受體結(jié)合，具有毒素活性的A亞單位進(jìn)入細(xì)胞，改變60s核糖體的組分，干擾蛋白質(zhì)的合成。編碼VT的基因位于噬菌體上，可缺失而不產(chǎn)生VT。
四、EHEC O157:H7的檢驗(yàn)
1、培養(yǎng)基制備：
改良EC新生霉素增菌肉湯 （mEC）
EC肉湯滅菌后添加20mg/mL過濾除菌的新生霉素，使終濃度為20μg/mL。
改良山梨醇麥康凱瓊脂（TC-SMAC）
山梨醇麥康凱瓊脂加入過濾除菌的1%亞碲酸鉀溶液，使終濃度2.5mg/L，頭孢克污，使終濃度為0.05mg/L。
MUG-LST肉湯
LST肉湯中添加4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG），使終濃度為0.1g/L。
2、增菌培養(yǎng)
秤取25克樣品放入225mL mEC中，均質(zhì)。于41±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。
3、分離
將mEC肉湯培養(yǎng)物10倍遞增稀釋。從10-4，10-5，10-6稀釋度，各取0.1mL涂布于TC-SMAC平板。于36±1℃培養(yǎng)18~24小時(shí)。可疑 EHEC O157:H7菌落扁平，透明或半透明，邊緣光滑，呈淡褐色中心，直徑約2mm。
4、鑒定
挑取TC-SMAC上的可疑菌落，接種MUG-LST，于36±1℃培養(yǎng)18~24小時(shí)，出現(xiàn)產(chǎn)氣，且無熒光者，分離到普通營養(yǎng)瓊脂。
對純菌落用EHEC O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或膠乳凝集試劑作凝集試驗(yàn)，必要時(shí)進(jìn)行生化試驗(yàn)。
在檢測過程中，也可以在選擇性增菌后，取出5mL增菌液，經(jīng)100℃水浴15分鐘滅活后，供自動酶聯(lián)熒光免疫測試（VIDAS），迅速獲得初步結(jié)果，陽性反應(yīng)者需作進(jìn)一步證實(shí)。
EHEC O157:H7檢驗(yàn)程序圖解
檢樣25g
↓
mEC225mL → VIDAS快速篩選
↓41±1℃，18-24h
10-4，10-5，10-6稀釋度涂布TC-SMAC
↓36±1℃，18-24h
挑取5-10個(gè)可疑菌落接種MUG-LST
↓36±1℃，18-24h
MUG陰性培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種普通營養(yǎng)瓊脂
↓ ↓
生化反應(yīng)鑒定 血清凝集鑒定
或
膠乳凝集試驗(yàn)
用上述方法在樣品中分離獲得的純菌落，經(jīng)抗E.coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或EHEC O157:H7膠乳凝集測試為陽性者，報(bào)告檢出腸出血性大腸桿菌O157:H7。
如需要進(jìn)一步檢測Vero毒素基因的存在，可通過接種Vero細(xì)胞或Hela細(xì)胞，觀察細(xì)胞病變進(jìn)行判定，或可使用基因探針檢測和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測法。（參見FDA細(xì)菌分析手冊第8版）
表1：EHEC O157:H7部分生化反應(yīng)特性
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靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn) |
陽性 |
|
MR-VP試驗(yàn) |
MR陽性 VP陰性 |
|
枸櫞酸鹽利用試驗(yàn) |
陰性 |
|
氧化酶試驗(yàn) |
陰性 |
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三糖鐵瓊脂 |
底及斜面黃色，H2S- |
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纖維二糖發(fā)酵 |
陰性 |
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山梨醇發(fā)酵 |
陰性或遲緩發(fā)酵 |
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賴氨酸脫羧酶 |
陽性（紫色） |
|
鳥氨酸脫羧酶 |
陽性（紫色） |
|
棉子糖發(fā)酵 |
陽性 |
|
衛(wèi)矛醇發(fā)酵 |
陽性 |
|
西蒙氏檸檬酸鹽 |
陰性 |
|
鼠李糖發(fā)酵 |
陽性 |
|
MUG試驗(yàn) |
陰性 |
|
動力試驗(yàn) |
有動力或無動力 |
表2： EHEC O157:H7與大腸埃希氏菌有鑒別意義的生化特性
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試驗(yàn)項(xiàng)目 |
E.coliO157:H7 （174株）% |
大腸埃希氏菌 |
|
|
（974株）% |
（1887株）% |
||
|
MUG |
0 |
96 |
NT |
|
山梨醇 |
0 |
95 |
80 |
|
棉子糖 |
100 |
20 |
49 |
|
衛(wèi)矛醇 |
100 |
50 |
49 |
|
賴氨酸 |
100 |
92 |
81 |
|
鳥氨酸 |
100 |
74 |
58 |
[注] NT為未檢測，表內(nèi)數(shù)字為陽性率。
五、控制
適宜的蒸煮，適當(dāng)?shù)膬Υ鏈囟龋瑐�(gè)人衛(wèi)生教育，防止糞便污染動物胴體是控制出血性大腸桿菌污染的主要措施。
