1.老師，就是對(duì)于生物素和葉酸曲線和理化的標(biāo)準(zhǔn)曲線是有區(qū)別的，不用追求R值嗎？

 

標(biāo)準(zhǔn)曲線代表是微生物的生長(zhǎng)趨勢(shì)，不同于理化檢驗(yàn)的化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品的含量曲線，R值是趨勢(shì)線擬合程度的指標(biāo)，手繪標(biāo)準(zhǔn)曲線或者Excel這兩種方式獲得的結(jié)果差異不大，均不必要體現(xiàn)R值，可以省略。

 

2.老師，是直接吸取一定體積的中間液加入固體奶粉樣品中進(jìn)行加標(biāo)回收嗎？

是的，直接混合再加提取液，算在第一步的整體的稀釋液體積里。

3.老師，你們的不銹鋼試管帽是定制的嗎？用的是螺旋口的試管嗎？

是實(shí)驗(yàn)室自己定制的，不銹鋼材質(zhì)。

菌種的傳代和菌懸液的制備都是用的螺口試管，易于保存和離心。

4.可以分享下葉酸的培養(yǎng)基嗎？BD好像買不到了？有用國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)基好的推薦嗎?

本試驗(yàn)現(xiàn)在用是博源諾信的葉酸培養(yǎng)基，貨號(hào)（F82210），對(duì)應(yīng)菌株是ATCC7469，效果可以。

5.老師，我們現(xiàn)在買不到大于99%的葉酸標(biāo)準(zhǔn)品，這個(gè)怎么辦？

進(jìn)行換算，比如買的標(biāo)準(zhǔn)品是95％的葉酸培養(yǎng)基，那么就用20mg除以95%，再除以1000，得到標(biāo)準(zhǔn)品的稱取的量為0.0211g（21.1mg）。

6.老師，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作是否可以選擇其中的部分點(diǎn)進(jìn)行，不滿足8管，只有5、6管時(shí)是否可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線？

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作要按照標(biāo)準(zhǔn)的要求，滿足8個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)保證3管平行，保證每個(gè)點(diǎn)都有數(shù)值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

7.老師，VB12紫外測(cè)定為何有兩個(gè)波長(zhǎng)？

GB5413.14-2010標(biāo)準(zhǔn)中描述的波長(zhǎng)為550nm，待發(fā)布的新標(biāo)準(zhǔn)GB5009.XX-XXXX給出的波長(zhǎng)是630nm。兩者差別不大。

8.老師，請(qǐng)問(wèn)如何減少加標(biāo)體積對(duì)樣品稀釋體積的影響？

選擇好加標(biāo)量后，無(wú)論選擇哪個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行添加，都要確保低于第一步的稀釋倍數(shù)即定容的容量瓶的體積，實(shí)際添加時(shí)很好區(qū)分應(yīng)該加哪個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

9.老師，維生素b12傳代用專用培養(yǎng)基還是LB？

都可以，萊士曼氏乳桿菌比其他的維生素測(cè)定菌株需要的營(yíng)養(yǎng)成分更精細(xì)，最好選用專用的，保證菌株活性。

10.老師，葉酸和VB12檢測(cè)時(shí)，在待測(cè)液制作環(huán)節(jié)時(shí)，您強(qiáng)調(diào)培養(yǎng)基煮沸后立即晾涼，我們實(shí)際應(yīng)用是煮沸后自然晾晾，沒(méi)有立即冷卻，煮沸后到培養(yǎng)基使用大概用時(shí)2h。

要立即冷卻，培養(yǎng)基加熱時(shí)間長(zhǎng)會(huì)顏色變深，破壞營(yíng)養(yǎng)成分，煮沸后的培養(yǎng)基是輕微渾濁的，冷水浴后會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得澄清。

11.B12第二次調(diào)pH調(diào)到6.8不好調(diào)，那最終是看靜止的pH還是搖動(dòng)的時(shí)候的pH？

吸取5mL到50ml小燒瓶中后，加入約20mL的水，這樣就能保證PH計(jì)探頭浸到液體里，用0.01moL的鹽酸和氫氧化鈉調(diào)PH，濃度太大控制不好。一邊搖勻一邊測(cè)定，最終看靜止讀數(shù)。

12.B12第二次調(diào)pH調(diào)到6.8不好調(diào)，那最終是看靜止的pH還是搖動(dòng)的時(shí)候的pH？

吸取5mL到50ml小燒瓶中后，加入約20mL的水，這樣就能保證PH計(jì)探頭浸到液體里，用0.01moL的鹽酸和氫氧化鈉調(diào)PH，濃度太大控制不好。一邊搖勻一邊測(cè)定，最終看靜止讀數(shù)。

13.老師，生物素測(cè)定時(shí)，制備好的菌懸液可放多長(zhǎng)時(shí)間？

一般24小時(shí)沒(méi)有問(wèn)題，但也不建議儲(chǔ)存太長(zhǎng)時(shí)間。按照樣品的數(shù)量和報(bào)數(shù)日期，合理安排時(shí)間準(zhǔn)備菌懸液，盡量使用新鮮培養(yǎng)的菌懸液。

14.容量瓶的清洗有要求嗎？

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有玻璃容器的清洗規(guī)定，按照程序清洗即可，只是在清洗后，一定要170℃高溫滅菌3h后待用，該步驟不是為了滅菌，而且是為了去除掉器皿表面殘留的微生物代謝產(chǎn)生的維生素對(duì)目標(biāo)物測(cè)定的影響。如果實(shí)驗(yàn)室有條件和空間允許，維生素測(cè)定用的玻璃器皿單獨(dú)存放，不與其他實(shí)驗(yàn)混用。

15.老師，請(qǐng)問(wèn)直接用質(zhì)控樣來(lái)控制試劑盒的檢測(cè)結(jié)果可以嗎？

可以，對(duì)于生產(chǎn)企業(yè)，建議和質(zhì)控樣一起，用自己的產(chǎn)品作為試劑盒驗(yàn)證的樣品。

16.sc煮沸滅菌，請(qǐng)問(wèn)：煮沸幾分鐘合適？

SC的滅菌方式參考培養(yǎng)基適用說(shuō)明，一般的煮沸滅菌目測(cè)培養(yǎng)基徹底溶解，溶液清亮為宜，SC培養(yǎng)基含有蛋白胨，主要使蛋白胨徹底溶解，分裝保存即可。

17.生物素試劑盒法和國(guó)標(biāo)方法如果每年有方法比對(duì)，方法比對(duì)結(jié)果比較好，可不可以直接用試劑盒法

即使每年的比對(duì)結(jié)果比較理想，也不建議直接用是試劑盒法，這是一種持續(xù)能力保持的體現(xiàn)，如果方法比對(duì)結(jié)果比較好，品牌更換不頻繁，建議擴(kuò)大產(chǎn)品適用范圍、用不同含量的樣品對(duì)試劑盒測(cè)試等來(lái)驗(yàn)證試劑盒的效能。