第一法 大腸菌群MPN法
1、取樣原則:本標準中對應(yīng)的檢樣量分別為0.1g(mL)、0.01g(mL)、0.001g(mL),根據(jù)樣品限量值,查閱附錄部分MPN表:
(1)無論固體或液體,當限量值為“<3.0”或其它任意能在標準“表1”中查到的數(shù)值,則分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:1000的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管;
(2)無論固體或液體樣品的限量值為“<0.3”或其它任意為MPN表中查到的數(shù)值縮小10倍的數(shù)值,則分別取10mL樣品1:10稀釋液接種到3管雙料LST肉湯管、分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料LST肉湯管(如蜂蜜的限量值為0.3MPN/g,即采取此做法)。
2、凡產(chǎn)酸或產(chǎn)氣的LST管,都取1環(huán)接種GBLB肉湯管,凡BGLG產(chǎn)氣者記為陽性。
第二法 大腸菌群平板計數(shù)法
(常見問題匯總)
1、VRBA培養(yǎng)相關(guān)問題
(1)所用器皿是否需要滅菌?
答:不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌,但要求一定要清洗干凈,表面無污漬、無殘留。煮沸完成后,取下錐形瓶,用一般常用的衛(wèi)生紙(軟紙)覆蓋瓶口,用橡皮筋纏繞,待冷卻至適宜溫度即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時,須點燃酒精燈,稍微灼燒錐形瓶口。
(2)如何保持“煮沸2min”?
答:可以用電磁爐或電熱板進行加熱煮沸,在該培養(yǎng)基即將煮沸時調(diào)低溫度。實際操作時,不需要嚴格按照此要求進行,加熱煮沸數(shù)秒即可。原因:本培養(yǎng)基很難保持煮沸2min,一旦煮沸,則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰,若不調(diào)低溫度或立刻采取其他措施,則培養(yǎng)基可在數(shù)秒內(nèi)噴涌出來,嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍(實驗室危險因子之一)。
(3)若培養(yǎng)基未用完,是否可以冷藏起來下次用?
答:不可以。4789.28中已規(guī)定,固體培養(yǎng)基最多允許熔融1次(指的是經(jīng)過高壓滅菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用)。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后,再次熔融時非常容易噴涌,若溫度控制不當,底部培養(yǎng)基熔融后很快就會發(fā)生噴涌(即培養(yǎng)基未完全熔融就會發(fā)生噴涌現(xiàn)象)。
(4)傾注完成后是否需要“覆蓋一層”?如何覆蓋?
答:一般情況下不需要覆蓋。在實際操作過程中,若檢驗員初次接觸該食品(或食品品類),則有必要在傾注培養(yǎng)基后再覆蓋一層(原因是不清楚該樣品是否會發(fā)生蔓延)。而如此往復(fù)測試幾次后,若該樣品或食品品類均不存在蔓延現(xiàn)象,則以后的實驗中都不需要進行覆蓋。若重復(fù)多次測試后都有蔓延現(xiàn)象,則以后的檢驗中最好都進行覆蓋,最好是在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固(不會發(fā)生晃動)時再傾注一層培養(yǎng)基(“一層”是指緩慢傾注培養(yǎng)基至培養(yǎng)基剛好能夠覆蓋整個平皿)。
2、如何確定培養(yǎng)基上長的是不是大腸菌群?
答:建議新手們認真按照標準進行證實試驗,此證實試驗簡單易操作,每一次VRBA上有菌落生長都進行證實試驗,如此往復(fù)3-4次,對于哪種形態(tài)才是大腸菌群已經(jīng)能夠了然于心。
第二部分、GB/T 4789.3-2003 《大腸菌群測定》——標準解讀
(標準補充)
1、由于MPN表中給出的檢樣量為1mL(g)、0.1mL(g)0.01mL(g)三個稀釋度,所以:
(1)無論固體或液體,當限量值為“<30”或其它任意能在標準“表1”中查到的數(shù)值,則分別取10mL 1:10的樣品勻液接種到3管雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管、分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發(fā)酵管、分別取1mL 1:100的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發(fā)酵管(有時限量值≤300,也建議同樣操作);
(2)若液體樣品的限量值為“<3”,則分別取10mL樣品原液接種到3管雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管、分別取1mL樣品原液接種到3管單料乳糖膽鹽發(fā)酵管、分別取1mL 1:10的樣品勻液接種到3管單料乳糖膽鹽發(fā)酵管,9管皆為陰性則符合該限量值。
2、大腸菌群在EMB培養(yǎng)基上的典型形態(tài)特征,參考GB 5750-2006中總大腸菌群發(fā)酵法相關(guān)章節(jié)。但仍然建議:一旦有菌落數(shù)生長,無論是否為典型形態(tài),都應(yīng)挑取進行革蘭氏染色及證實試驗。
3、最后一次證實試驗,凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣(無論氣泡大。┣腋锾m氏染色鏡檢為陰性則判定為大腸菌群陽性。
第三部分、那如何判斷咱們的產(chǎn)品到底是應(yīng)該用哪個版本的大腸菌群計數(shù)方法呢?
以GB 2726-2016《食品安全國家標準 熟肉制品》為例,其中大腸菌群指標如下:
該標準提到的檢驗方法并未寫明是按GB 4789.3-2016中的第一法還是第二法檢測,那現(xiàn)在按檢測標準來分析一下:
1. GB/T 4789.3-2003的檢測結(jié)果單位為MPN/100克或MPN/100毫升”
2. GB 4789.3-2016中的第一法中的檢測單位為“MPN/克或MPN/毫升”
3. GB 4789.3-2016中的第二法檢測結(jié)果單位為“CFU/克或CFU/毫升”
綜上,GB 2726-2016《食品安全國家標準 熟肉制品》中大腸菌群檢測應(yīng)該為GB 4789.3-2016版中第二法。