手機(jī)版
一、革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，轉(zhuǎn)化過(guò)程的幾個(gè)階段：
1.細(xì)菌感受態(tài)的形成
由于分泌一種稱(chēng)為感受態(tài)因子的小蛋白而導(dǎo)致細(xì)菌感受態(tài)的形成。
2.轉(zhuǎn)化因子的吸收
雙鏈DNA片段與感受態(tài)受體菌的細(xì)胞表面特定位點(diǎn)結(jié)合，并激活臨近的核酸酶。DNA雙鏈中的一條單鏈逐步降解，同時(shí)另一條單鏈逐步進(jìn)入細(xì)胞。
3.整合復(fù)合物前體的形成
一種特殊蛋白與單鏈DNA結(jié)合，有效保護(hù)單鏈DNA免遭核酸酶的降解，并將其引導(dǎo)至受體菌染色體DNA處。
4.單鏈DNA轉(zhuǎn)化因子的整合
轉(zhuǎn)化DNA單鏈可以通過(guò)同源重組，置換受體細(xì)胞染色體DNA的同源區(qū)，形成異源雜合雙鏈DNA結(jié)構(gòu)。
5.轉(zhuǎn)化子的形成
受體菌染色體組進(jìn)行復(fù)制，雜合區(qū)段亦半保留復(fù)制，當(dāng)細(xì)胞分裂后，此染色體發(fā)生分離，于是新形成一個(gè)轉(zhuǎn)化子。
二、影響轉(zhuǎn)化的因素
1.DNA能否進(jìn)入細(xì)胞；
2.DNA進(jìn)入細(xì)胞后的穩(wěn)定性；
3.質(zhì)粒DNA的大小，大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率低于小質(zhì)粒，到目前，大于30kb的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化效率仍很低；
4.DNA的濃度、純度和形狀；
5.誘導(dǎo)感受態(tài)細(xì)菌所用的離子的種類(lèi)和濃度；
6.熱休克時(shí)間的長(zhǎng)短及平板培養(yǎng)條件等。
