首先我們應該了解我們的無菌室應該處于什么狀態(tài)，有什么要求。一般情況下，我們的無菌室達到空間潔凈度10000級就可以了，但操作區(qū)域例如超凈工作臺、生物安全柜里需要達到潔凈度100級，也就是我們常說的“整體萬級，局部百級”。萬級潔凈度對空間落菌的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌≤3CFU/皿，百級潔凈度對空間落菌的要求是：靜態(tài)檢測，自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是說平時我們做的空間驗證，只要不超過這個標準，就是符合要求的，因此也不必太過擔憂。

那么，怎樣能夠保證我們的無菌室符合要求？當我們的無菌室出現(xiàn)異常應該如何處理？

我們得先從無菌室的滅菌方式開始講。一般無菌室的滅菌方式分為：紫外線照射、臭氧滅菌、化學熏蒸這幾種。這幾種滅菌方式各自有各自的特點，大家可以根據(jù)自己的實際情況來選擇合適的滅菌方式，遇到異常難以解決時，也可以考慮增加一種滅菌方式來解決。

紫外線照射：紫外線滅菌是利用適當波長的紫外線破壞微生物機體細胞中的DNA或RNA結構，造成生長性細胞死亡來達到滅菌效果，屬于一種物理方式的滅菌，也是我們微生物檢測無菌室最常用的滅菌方式。該方法操作簡單，使用方便，也比較經濟，可以殺滅各種微生物，包括細菌、病毒、真菌、立克次體以及支原體等，因此在實驗室里，是最常見的滅菌方式。

但紫外線滅菌也有一定的缺點，紫外線只能對直接照射到的微生物起到殺滅作用，因此只能對空間中照射到的地方起作用，一些照射不到的死角或者物品的內部是無法達到效果的，因此使用紫外線滅菌的無菌室，也會輔助以一些化學試劑，例如潔爾滅、酒精等消毒劑對死角進行清理。使用紫外線滅菌，應當定期檢測紫外線的強度，若是無法達到要求的強度，就應該考慮更換紫外燈。根據(jù)2002年國家衛(wèi)生部發(fā)布的《消毒技術規(guī)范》，紫外燈的要求是紫外線強度不得低于70μW/cm²（紫外燈1m處），而空間內的紫外燈的布局也是有要求的，要求平均每m³不少于 1.5W。也就是說，假如你無菌室是5m²，實驗室高度是3米，那么你的空間體積就是15m³，你空間中使用的紫外燈的功率就不得低于22.5w。按照這個方式就可以算一下你的無菌室需要多少紫外燈了。當紫外線的強度達不到要求時，就需要更換紫外燈了。

臭氧滅菌：臭氧是一種強氧化劑，滅菌過程屬生物化學氧化反應。

O₃滅菌原理一般有以下三種：

1.臭氧通過氧化分解細菌內部葡萄糖所需的酶，使細菌滅活死亡。

2.直接與細菌、病毒作用，破壞它們的細胞器和DNA、RNA，使細菌的新陳代謝受到破壞，導致細菌死亡。

3.透過細胞膜組織，侵入細胞內，作用于膜內的脂蛋白和內部的脂多糖，改變細胞的通透性，導致細胞溶解死亡。

使用臭氧滅菌，殺菌徹底，無殘留，殺菌廣譜，可殺滅細菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。另外，O3對霉菌也有極強的殺滅作用。O3為氣體，能迅速彌漫到整個滅菌空間，滅菌無死角。所以，臭氧滅菌也是目前被廣泛使用的滅菌方式。用臭氧消毒空氣，必須是在封閉空間，且室內無人條件下進行，消毒后至少過 30min 才能進入。另外臭氧的密度比空氣大，在空氣中會迅速下降到空間的底層，因此臭氧發(fā)生器也應當安裝在無菌室的頂部。一般滅菌時間選擇30min即可，要求空間中臭氧濃度不低于20mg/m³。

化學熏蒸：化學熏蒸是一種十分傳統(tǒng)的空間滅菌方式，一般是采用易揮發(fā)氣化的化學物質的蒸汽對空間微生物進行殺滅的目的，一般常用甲醛、戊二醛、過氧化氫、過氧乙酸等。

這里以常用的甲醛熏蒸為例。一般甲醛熏蒸又稱甲醛高錳酸鉀熏蒸，將40%的甲醛溶液加入到高錳酸鉀溶液中，二者發(fā)生反應，放出大量的熱使甲醛蒸發(fā)到空間中，從而對無菌室進行滅菌。一般甲醛熏蒸的滅菌效果比較理想，對霉菌等較難清除的污染菌也有較好的殺滅效果，因此在無菌室被霉菌污染時，通常都是使用甲醛進行熏蒸來徹底消滅污染源。

但是甲醛熏蒸的缺點也是很明顯的，因為甲醛是一種強致癌性的化學品，對人體的傷害較大，在使用過程中需要特別注意，并且殘留量也要進行嚴格的控制。每次熏蒸后，至少需要通風24h才可以使用。

目前對熏蒸后甲醛的殘留量并沒有明確要求，還是要通過經驗來判斷，目前國家對居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m³，所以我們也可使用甲醛含量測定儀來對熏蒸后的空間進行檢測。目前甲醛熏蒸滅菌的方法食品檢測無菌室的滅菌中已經較少使用，主要也是因為操作比較繁瑣，滅菌時間較長，進行一次甲醛熏蒸之后，會有幾天無法使用無菌室進行檢測，所以只有在其他滅菌方法無法達到理想的滅菌效果時，才會考慮進行甲醛熏蒸。

而其實這種滅菌方式目前在很多藥企的無菌室滅菌，還是會經常用到的，另外，有些生產區(qū)域如果長期被霉菌污染，也會考慮用甲醛熏蒸的方法來解決。

了解了這幾種常用的無菌室滅菌方式，在我們日常的工作中也可以根據(jù)自己實驗室情況進行選擇，尤其是長期使用一種滅菌方式若是滅菌效果達不到理想的效果時，可以根據(jù)實際情況更換滅菌方式，或者引進一種新的滅菌方式兩者結合，以期達到預想的效果。