一般菌種臨時(shí)存放及活化
無(wú)菌培養(yǎng)
平板劃線分離法
一般操作過(guò)程
1、在無(wú)菌操作下,用無(wú)菌微量吸管,從已溶解的管中吸取50μL(或1-2滴)的菌液,滴入固態(tài)指定培養(yǎng)基(培養(yǎng)基編號(hào)及溫度示于菌株訂購(gòu)單)某一邊緣附近,以劃線法接種于培養(yǎng)基。
2、將接種好的培養(yǎng)基置于指定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3、在無(wú)菌環(huán)境下,以沾有75%酒精的棉花擦拭外管,在火焰上加熱外管之尖端。滴數(shù)滴無(wú)菌水于加熱處,使外管破裂,再以硬棒敲破尖端。取出隔熱纖維紙和內(nèi)管,以滅菌過(guò)的鑷子取出內(nèi)管之棉塞。
4、(a)適用于細(xì)菌用無(wú)菌吸管,吸取0.3-0.5mL指定之液體培養(yǎng)基,滴入內(nèi)管內(nèi),并輕微震蕩(可用該吸管協(xié)助),直到均勻懸浮。
(b)適用于霉菌、酵母菌用無(wú)菌吸管,吸取0.3-0.5mL無(wú)菌水,滴入內(nèi)管內(nèi),待干燥粉末溶解后,以無(wú)菌吸管吸取并滴入約含有5ml無(wú)菌水之試管內(nèi),輕微震蕩使其均勻后,靜置30至60分鐘。
5、取0.1-0.2mL之菌體懸浮液于指定的平板培養(yǎng)基上,做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋,用無(wú)菌L型玻棒均勻涂抹,以檢驗(yàn)菌種之純度及活化情形,而剩余的菌體則全部移入指定的液體培養(yǎng)基內(nèi),并依指定的溫度培養(yǎng)之。
6、某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后,遲滯期(lagperiod)較長(zhǎng),必須等培養(yǎng)二倍時(shí)間后才能長(zhǎng)出,且再經(jīng)過(guò)一、二次繼代培養(yǎng)(Subculture)后才能正常生長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)以上的努力后仍培養(yǎng)失敗,才視為不能活化。
7、未開(kāi)封之冷凍干燥管,請(qǐng)冷藏于4℃冰箱,切勿冷凍保存。