微生物的分類有很多,微生物包括細菌、細胞以及病毒支原體衣原體螺旋體等分類,在微生物學上,不同的微生物有不同的染色方法以便于觀察,那么有哪些基礎(chǔ)的染色呢?染色方法有很多比如:單染色法、革蘭染色法、抗酸染色法、Fontana鍍銀染色法、蓋梅尼次染色法、乳酸酚棉藍染色法、芽孢染色法、莢膜染色、鞭毛染色法等。
下面詳細介紹一下革蘭氏染色法、乳酸酚棉藍染色法、芽孢染色法、莢膜染色、法鞭毛染色法
一、革蘭氏染色
1 操作步驟
涂片:將培養(yǎng)的不同菌分別作涂片(注意涂片切不可過于濃厚),干燥、固定。固定時通過火焰1-2 次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。
初染:加結(jié)晶紫液蓋滿標本處,染一分鐘后水洗,并將玻片上積水輕輕甩凈。
媒染:加碘液蓋滿標本處,1分鐘后水洗,甩凈玻片上積水。
脫色:加95%酒精蓋滿標本,輕輕搖動玻片,約20秒鐘后水洗、甩干。
復染:加稀釋石炭酸復紅液或沙黃溶液1-2滴蓋滿標本,染30秒鐘后水洗,待標本自干或用吸水紙印干。
觀察:鏡檢干燥后置油鏡觀察,革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準,過于密集的細菌,常常呈假陽性。
二、乳酸酚棉藍染色法
1 操作步驟
染色:于潔凈載玻片上,滴1-2滴乳酸酚棉藍染色液,用解剖針從霉菌菌落的邊緣外取少量帶有 孢子的菌絲置于染色液中,再細心地將菌絲挑散開,然后小心地蓋上蓋玻片,注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,必要時再換高倍鏡。
觀察:染好后的標本片用顯微鏡觀察結(jié)果,酵母菌細胞、菌絲體和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等皆可被染成亮藍色;背景為暗淡的藍色。
三芽孢染色法
1 操作步驟
一般革蘭氏染色只能把芽孢周圍的細胞質(zhì)染色,不能直接把芽孢染上,故芽孢會透亮,能夠觀察到芽孢。若不清晰可進一步采用芽孢染色法。
染色:用接種環(huán)取菌樣涂布于玻片上,待自然干燥。而后通過火焰加熱將菌固定于玻片上。將涂片放入平皿內(nèi),片上放兩層濾紙,滴加足量的5.0%孔雀綠水溶液。將平皿蓋好,54℃-56℃水浴加熱30min。取出,去濾紙,用純化水沖洗殘留孔雀綠溶液。加0.5% 沙黃水溶液,染1min。水洗,待干后油鏡觀察。
觀察:染好后的標本片用顯微鏡觀察結(jié)果,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。
三、莢膜染色法
莢膜(capsule)是某些細菌表面的特殊結(jié)構(gòu),是位于細胞壁表面的一層松散的粘液物質(zhì),莢膜的成分因不同菌種而異,主要是由葡萄糖與葡萄糖醛酸組成的聚合物。
1 操作步驟
涂片:按常規(guī)法涂片,可多挑些菌體與水充分混合,并將粘稠菌液盡量涂開,涂布面積不宜過大。
干燥:在空氣中自然干燥。
染色:用溶液A染5-7分鐘。
脫色:用溶液B洗去結(jié)晶紫,脫色要適度(沖洗2遍)。用吸水紙吸干,并立即加1-2滴香柏油于涂片處,以防止CuSO4結(jié)晶的形成。鏡檢。
觀察:背景藍紫色,菌體紫色,莢膜無色或淺紫色。
五、鞭毛染色法
長在某些細菌菌體上細長而彎曲的具有運動功能的蛋白質(zhì)附屬絲狀物,稱為鞭毛。許多細菌都是運動的,通常使用鞭毛移向營養(yǎng)物質(zhì)。鞭毛很薄,不易染色和觀察。
1 操作步驟
涂片:取幼齡細菌培養(yǎng)物制成涂片。
干燥:火焰干燥及固定。
染色:鞭毛染色液2-3滴,在室溫中染色2-3分鐘。
脫色:水洗,干燥后鏡檢(油鏡)。
觀察:菌體和鞭毛呈紫色。