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進(jìn)入微生物室的物品通過(guò)傳遞窗，經(jīng)過(guò)紫外消毒后進(jìn)入微生物室。為了確認(rèn)傳遞窗紫外燈的消毒效果，特起草本方案對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。本驗(yàn)證用于QC微生物室、無(wú)菌室傳遞窗紫外燈表面消毒效果檢查。
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儀器名稱(chēng) |
型號(hào)或規(guī)格 |
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凈化工作臺(tái) |
HS-1300-V型 |
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菌落計(jì)數(shù)器 |
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紫外線強(qiáng)度測(cè)定儀 |
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穩(wěn)壓器 |
220V |
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細(xì)菌培養(yǎng)箱 |
SHP-150型 |
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ù菌培養(yǎng)箱 |
GNP-9270型 |
3.1滅菌刻度吸管（1mL，10mL）
3.2滅菌試管
3.3滅菌平皿
3.4酒精燈
3.5載體：（1.0×1.0cm的玻片）
4.1純化水
4.2營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
4.3改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基
4.4營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基
4.5改良馬丁培養(yǎng)基
4.6金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]
4.7枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63 501]
4.8大腸桿菌[CMCC（B）44 102]
4.9白色念珠菌[CMCC（F）98 001]
4.10稀釋液（0.1％吐溫80，0.1％蛋白胨溶液）
5.1 試驗(yàn)環(huán)境
試驗(yàn)在潔凈度10 000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，全過(guò)程嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。
ÿ次操作開(kāi)始前，開(kāi)紫外燈照射1小時(shí)。
5.2 培養(yǎng)基的制備
5.2.1營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
配方：
營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉 31.0g
純化水 1000mL
配制：
根據(jù)需要量稱(chēng)取營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉置適宜容器中，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調(diào)pH至7.1±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。
5.2.2 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基
配方：
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基粉 42.0g
純化水 1000mL
配制：
根據(jù)需要量稱(chēng)取改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調(diào)pH至6.4±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌115℃×20分鐘。
5.2.3 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基
配方：
營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 20g
純化水 1000mL
配制：
稱(chēng)取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基20克，加1000mL純化水，加熱溶解，加熱至沸，冷卻至常溫，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。
5.2.4改良馬丁培養(yǎng)基
配方：
改良馬丁培養(yǎng)基粉 28.0g
純化水 1000mL
配制：
根據(jù)需要量稱(chēng)取改良馬丁培養(yǎng)基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調(diào)pH至6.4±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌115℃×20分鐘。
5.3方法驗(yàn)證試驗(yàn)
5.3.1輻照強(qiáng)度測(cè)定
5.3.1.1開(kāi)啟紫外燈5min后，用中心波長(zhǎng)為253.7nm的紫外線強(qiáng)度測(cè)定儀在燈管下方垂直1m的中心處測(cè)量其輻照度值（uW/cm2）。
5.3.1.2測(cè)量時(shí)，電壓應(yīng)穩(wěn)定在220V。
5.3.1.3普通型或低臭氧型直管紫外線燈（30W），在燈管下方垂直1m的中心處，新燈管的輻照度值應(yīng)≥90 uW/cm2 。使用中的燈管的輻照度值應(yīng)≥70 uW/cm2 ，低于此值者應(yīng)予更換。
5.3.2 照射劑量
表面消毒接受的照射劑量，應(yīng)達(dá)殺滅目標(biāo)微生物所需。對(duì)大腸桿菌，照射劑量應(yīng)達(dá)到7.5×103 uW·s/cm2,對(duì)金黃色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌應(yīng)達(dá)到2.53×104uW·s/cm2。
5.3.2.1照射劑量計(jì)算：
照射劑量（uW·s/cm2 ）＝紫外燈管強(qiáng)度（uW/cm2）×?xí)r間（s）
5.3.3 細(xì)菌及其芽孢和真菌殺滅效果的測(cè)定
5.3.3.1菌液的制備
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接種菌種名稱(chēng) |
接種培養(yǎng)基 |
培養(yǎng)條件 |
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金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物 |
營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 |
30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí) |
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大腸桿菌新鮮培養(yǎng)物 |
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枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物 |
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白色念珠菌新鮮培養(yǎng)物 |
改良馬丁培養(yǎng)基 |
23～28℃培養(yǎng)24～48小時(shí) |
金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、白色念珠菌培養(yǎng)后，將菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。
5.3.3.2 將滅菌載體平放于滅菌平皿內(nèi)，ÿ個(gè)載體滴注定量菌懸液，（載體回收菌量達(dá)5×105～5×106cfu/片），涂勻，放37℃培養(yǎng)箱烘干。開(kāi)啟紫外燈5min后，將16個(gè)染菌玻片平放于滅菌平皿內(nèi)，水平放于適當(dāng)距離照射，于4個(gè)不同間隔時(shí)間（15min、30 min、45 min、60 min）各取出4個(gè)染菌玻片，分別投入4個(gè)盛有5mL洗脫液試管中，振打80次。
5.3.3.3經(jīng)適當(dāng)稀釋后，取1mL洗脫液，作平板傾注，ÿ個(gè)染菌玻片接種兩個(gè)，細(xì)菌放30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)作活菌計(jì)數(shù)，真菌放23～28℃培養(yǎng)72小時(shí)作活菌計(jì)數(shù)。
5.3.3.4陽(yáng)性對(duì)照，除不做照射處理外，取4個(gè)染菌玻片，分別投入4個(gè)盛有5ml洗脫液試管中，振打80次。余按7.4.2.3同樣操作。
5.3.3.5計(jì)算殺滅率
殺滅率（％）＝ （陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù)－試驗(yàn)組回收菌數(shù)）/陽(yáng)性對(duì)照回收菌數(shù) ×100％
5.3.3.6判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)指示菌殺滅率≥99.9％判為消毒合格。
附件1. 試驗(yàn)菌數(shù)量測(cè)定原始記¼
傳遞窗構(gòu)造或紫外燈管放置λ置發(fā)生改變時(shí)。
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文件編號(hào) |
文件名稱(chēng) |
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020141 |
微生物實(shí)驗(yàn)室管理 |
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020143 |
物品進(jìn)出微生物檢驗(yàn)室 |
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020342 |
微生物檢驗(yàn)區(qū)的清潔消毒 |
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020343 |
培養(yǎng)基的配制 |
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020344 |
細(xì)菌的接種、傳代和保存 |
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020377 |
高壓滅菌 |
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021267 |
微生物數(shù)量的測(cè)定 |
QA必須參與驗(yàn)證的評(píng)審階段；
QA必須審閱最終報(bào)告（包括草案）；
QA審閱者不應(yīng)是參與實(shí)施的其他QA人員。
在實(shí)施過(guò)程中，如果方案需要修改，必須提交書(shū)面的報(bào)告，闡述修改的原因，修改的內(nèi)容，并經(jīng)過(guò)驗(yàn)證小組負(fù)責(zé)人及QA的認(rèn)可。修改后的方案同先前執(zhí)行的方案一起歸檔。
所有的相關(guān)文檔都應(yīng)該保留至少5年，這些文檔應(yīng)包括如下內(nèi)容：
原始方案、修改后的方案（如果有的話(huà)）、偏差報(bào)告、原始數(shù)據(jù)、原始報(bào)告和最終報(bào)告、其中，報(bào)告應(yīng)該包括以下內(nèi)容：
記¼的原件（或復(fù)印件）、測(cè)試項(xiàng)目及條款、實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束的日期、材料和方法描述、出現(xiàn)的偏差描述（如果有的話(huà)）、實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
