樣品的制備和稀釋倍數(shù)的選擇
對(duì)于冰凍的樣品,在接種前要放到0~4℃的冰箱中解凍。固體樣品要用滅菌刀或鑷子從不同部位采取試驗(yàn)材料并混合,在無菌操作下充分研細(xì),混勻,做成均勻稀釋液。樣品制備的整個(gè)過程都應(yīng)在無菌狀態(tài)下進(jìn)行,以防污染。任何樣品在打開包裝前,都要在取樣開口處的周圍表面進(jìn)行消毒。錯(cuò)誤操作是:冰凍樣品的解凍時(shí)間過長(zhǎng),導(dǎo)致細(xì)菌增殖,使實(shí)測(cè)結(jié)果偏高;固體樣品取樣不均衡,稀釋液未充分混勻,使所測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度降低;取樣時(shí)未進(jìn)行外包裝消毒,引起樣品污染。
充氣飲料應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行排氣;酸性樣品用經(jīng)過滅菌的20~30% 碳酸鈉溶液調(diào)整pH值到中性;含鹽量較高的樣品應(yīng)用滅菌蒸餾水進(jìn)行稀釋。錯(cuò)誤操作是:充氣飲料未經(jīng)排氣,使樣品接種量偏低;酸性樣品未調(diào)pH值,使不適合酸性狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)菌受抑制;高鹽樣品仍用生理鹽水進(jìn)行稀釋,使不適于高鹽狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)菌受抑制,結(jié)果均使實(shí)測(cè)值偏低。
不同的食品其「菌落總數(shù)」的檢出限量也不一致。醬油、奶制品、熟肉制品等細(xì)菌含量一般偏高,稀釋度可相應(yīng)選擇較大的,如1:100 和1:1000 等,而飲料、糕點(diǎn)類樣品中細(xì)菌量偏低,稀釋度應(yīng)選擇較小的,如液體樣品可選原樣,固體樣品選1:10 等。錯(cuò)誤操作是:選擇的稀釋度過大,使得菌落生長(zhǎng)稀少,或者稀釋度過小,菌落生長(zhǎng)密度高,難以計(jì)數(shù),導(dǎo)致實(shí)測(cè)結(jié)果或偏高或偏低。
接種、培養(yǎng)過程中應(yīng)注意的問題
接種時(shí),用移液管吸取稀釋液不應(yīng)用吸球,而要用管口上部塞有脫脂棉球的經(jīng)過高溫烘烤的移液管,以防產(chǎn)生交叉污染。稀釋液加入平皿后,應(yīng)在盡可能快的時(shí)間內(nèi)傾入瓊脂(傾倒瓊脂時(shí),應(yīng)保證瓊脂溫度在50~60℃,溫度過高,易殺死細(xì)菌;溫度過低,則瓊脂提前凝固,導(dǎo)致檢測(cè)失。,并立即在桌面上推旋平皿,使樣液與瓊脂混合均勻,切忌推旋動(dòng)作過大,將瓊脂濺到平皿蓋上,影響測(cè)定結(jié)果。
平皿內(nèi)瓊脂凝固后,不要長(zhǎng)久放置后才翻轉(zhuǎn)平皿培養(yǎng),而應(yīng)在瓊脂凝固后立即將平皿翻轉(zhuǎn)予以培養(yǎng),這樣可避免菌落蔓延生長(zhǎng),難以計(jì)數(shù)。
配制、分裝稀釋液或傾注平板不能在日光直射下進(jìn)行,以防強(qiáng)烈的日光將細(xì)菌殺死。
在培養(yǎng)時(shí),恒溫培養(yǎng)箱的溫度不能過高,以免出現(xiàn)蔓延生菌的趨勢(shì),但也要防止因通風(fēng)和空氣循環(huán)而造成的培養(yǎng)基太干,而影響細(xì)菌的正常生長(zhǎng)。
滅菌消毒過程中應(yīng)注意的問題
細(xì)菌檢測(cè)過程中所用到的一切用具和培養(yǎng)基都需經(jīng)過滅菌程序。接種室要經(jīng)常用消毒液進(jìn)行地面、墻面和桌面的消毒處理。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,還要經(jīng)紫外燈照射殺菌。檢測(cè)人員的實(shí)驗(yàn)服也要經(jīng)常用消毒液浸泡消毒。凡是能在高溫下烘烤的玻璃器皿、金屬器械等都應(yīng)用專用紙包好并在170℃烘烤3小時(shí)以上,以徹底滅菌。培養(yǎng)基和液體試劑,則要在高壓鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌。高壓鍋使用時(shí)應(yīng)注意在升壓前要放凈鍋內(nèi)殘存的空氣,以保證所需的壓力,達(dá)到滅菌效果。滅菌效果的好壞可通過空白試驗(yàn)確定。空白試驗(yàn)有空氣空白、稀釋用水空白、器皿空白等,完美的空白試驗(yàn)平板上應(yīng)該無細(xì)菌生長(zhǎng)。
菌落計(jì)數(shù)在完成培養(yǎng)后應(yīng)立即進(jìn)行,以防細(xì)菌繼續(xù)生長(zhǎng)蔓延影響實(shí)測(cè)結(jié)果。由于不小心、視力疲勞或菌落沒有辨認(rèn)好,均可導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果,因此,檢測(cè)人員在計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)采取多人同時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法,以避免這種情況造成的誤差。
如果所有稀釋度的平板均無細(xì)菌生長(zhǎng),則檢測(cè)報(bào)告應(yīng)以最低稀釋度報(bào)出,如最低稀釋度為1,則報(bào)為<1;若最低稀釋度為1:10,則報(bào)為<10,而不能報(bào)為「未檢出」。
以上所描述內(nèi)容,均是在實(shí)際檢測(cè)「菌落總數(shù)」過程中易發(fā)生錯(cuò)誤操作之處。只有檢測(cè)人員嚴(yán)格按要求進(jìn)行實(shí)際操作,避免產(chǎn)生上述錯(cuò)誤,才能保證科學(xué)、準(zhǔn)確地得出符合樣品實(shí)際的檢測(cè)結(jié)果,體現(xiàn)技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)工作的科學(xué)性和公正性。