答:GB 4789.2要求每個樣品選擇2-3個適宜的稀釋度進(jìn)行檢測。即使一個樣品已經(jīng)基本可以確定了菌落數(shù)了,也建議多檢測一個稀釋度,多一個稀釋度也會對檢測結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,只測一個稀釋度會存在風(fēng)險。另外如果嚴(yán)格按照國標(biāo)要求,這樣的檢測也是不符合要求的,某些要求嚴(yán)格的外審部門可能會對此開具不符合項(xiàng)。因此在檢測中還是應(yīng)該嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
2.如何保證檢測結(jié)果的有效性?
答:檢驗(yàn)過程中需要做空白對照,用來判斷培養(yǎng)基、稀釋液、平皿或吸管是否存在污染。同時需要定期檢測空氣潔凈度,判斷實(shí)驗(yàn)室環(huán)境是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求,如潔凈工作臺就要求百級(沉降菌<1CFU/皿)。
3.菌落總數(shù)計(jì)數(shù)同一個稀釋度一個在計(jì)數(shù)范圍,一個不在計(jì)數(shù)范圍,怎么計(jì)?
答:同一稀釋度的兩個平板,一個在計(jì)數(shù)范圍內(nèi),一個不在計(jì)數(shù)范圍內(nèi),則以在計(jì)數(shù)范圍內(nèi)的平板的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)作為報告結(jié)果。舉例說明,某樣品檢測結(jié)果:10-1兩平板菌落數(shù)分別為320、288,10-2稀釋度兩平板菌落數(shù)為27、23,則樣品的檢測結(jié)果應(yīng)選取288進(jìn)行報告,報告結(jié)果為2.9*103CFU/g。
4.菌落總數(shù)檢測中,所有稀釋度菌落都多不可計(jì),記錄結(jié)果怎么寫?
答:GB4789.2-2016中要求:若所有稀釋度平板上菌落數(shù)均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),其他平板可記錄為多不可計(jì),結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。但是遇到這種問題也分兩種情況,若是平板上的菌落數(shù)可計(jì)但超過300CFU,可以按照國標(biāo)要求進(jìn)行;若平板上的菌落數(shù)過多,導(dǎo)致無法準(zhǔn)確計(jì)數(shù),建議對樣品進(jìn)行復(fù)測,復(fù)測時可增加1-2個稀釋度。
5.平行對照板結(jié)果相差較大或者低稀釋度平板菌落數(shù)少于高稀釋度平板菌落數(shù)的原因?
答:平行板結(jié)果相差較大可能是由于樣液未完全混勻,導(dǎo)致菌落分布不均勻,實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)使用拍打式均質(zhì)器拍打1min~2min或者使用均質(zhì)杯8000r / min~10000r/min均質(zhì) 1min~2min,使樣液混合均勻。
6.而低稀釋度平板菌落數(shù)少于高稀釋度平板菌落數(shù)的原因是?
答:產(chǎn)品中加入防腐劑或者抑菌物質(zhì),做第一個稀釋度的時候,由于濃度大,防腐劑的含量也大,會抑制細(xì)菌的生長,第二、第三個稀釋度的時候由于濃度小,防腐劑的含量也相對少了,抑菌作用也小,所以出現(xiàn)這種情況;
B.產(chǎn)品本身呈酸性,需要添加石炭酸溶液調(diào)節(jié)pH至中性,否則會出現(xiàn)低稀釋度比高稀釋度平板菌落數(shù)少。
7.做菌落總數(shù)檢測時,沒有菌落是怎么回事?
答:首先,要確認(rèn)下是不是樣品的問題,某些檢測樣品經(jīng)過高溫殺菌之后,本身就沒有太多菌,所以沒有菌落也是正常的。其次,過程操作有沒有問題,比如用于檢測的稀釋液使用時是不是溫度太高,或者倒培養(yǎng)基時培養(yǎng)基溫度過高,亦或者培養(yǎng)基質(zhì)量問題、培養(yǎng)箱溫度偏低等。最后,檢測時選擇的稀釋度過高,也可能導(dǎo)致沒有菌落生長。總之出現(xiàn)這種情況需要從各個方面進(jìn)行分析。其實(shí)首先就應(yīng)該確認(rèn)樣品本身,很多檢測樣品檢測平板不長菌落也是正常的。
8.菌落總數(shù)的單位CFU與個有什么區(qū)別?
答:菌落形成單位叫做CFU。CFU的含義是形成菌落的菌落個數(shù),不等于細(xì)菌個數(shù)。(比如兩個相同的細(xì)菌靠得很近或貼在一起,那么經(jīng)過培養(yǎng)這兩個細(xì)菌將會形成一個菌落,此時就是2個細(xì)菌,1CFU。)菌落總數(shù)往往采用的是平板計(jì)數(shù)法,經(jīng)過培養(yǎng)后我們計(jì)數(shù)出平板上所生長出的菌落個數(shù),從而計(jì)算出每毫升或每克待檢樣品中可以培養(yǎng)出多少個菌落,于是以CFU/ml或CFU/g報告。
9.菌落蔓延的原因及解決辦法?
答:菌落蔓延主要有兩個原因,一是操作不當(dāng);二是樣品中含有變形桿菌等運(yùn)動性強(qiáng)的細(xì)菌。 操作中需要注意3個關(guān)鍵點(diǎn):
A. 傾注培養(yǎng)基時搖晃平皿使其混合均勻,減少菌塊;
B. 樣品稀釋后,盡快傾注平板。從稀釋到傾注結(jié)束時間控制在30 分鐘之內(nèi),避免樣液干涸造成菌落成團(tuán);
C.平板凝固后馬上倒置若樣品中含有變形桿菌,則可以覆蓋一層培養(yǎng)基。但是用此法時,最好做一對照,因?yàn)橛幸环N觀點(diǎn)認(rèn)為:此法會使菌落數(shù)減少。
10.怎樣區(qū)分細(xì)菌菌落與食品顆粒?
A:如果平板上食品顆粒與菌落形態(tài)較為接近,為了避免和細(xì)菌菌落發(fā)生混淆,可多傾注一塊平板置于4℃冰箱中放置,在計(jì)數(shù)時用于對照。另外也可以在已融化而保溫在46℃水浴的PCA中加入0.5%TTC溶液,培養(yǎng)后食品顆粒不變色,細(xì)菌為紅色。注意TTC的濃度不要過高,會有抑制細(xì)菌生長作用(食品檢測一般不建議使用TTC,會有一定的抑菌效果)。
11.為什么平板計(jì)數(shù)瓊脂需要調(diào)節(jié)pH?
答:培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細(xì)菌生長要求。平板計(jì)數(shù)瓊脂是用來檢測樣品中的菌落總數(shù)的,而大部分細(xì)菌都是嗜中性的,所以需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH至7.0±0.2,保證細(xì)菌生長環(huán)境的適宜,從而確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
12.為什么平板計(jì)數(shù)瓊脂需要高壓蒸汽滅菌,而結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂只需煮沸滅菌?
答:培養(yǎng)基滅菌是為了避免外部帶入的菌對檢測結(jié)果造成影響。平板計(jì)數(shù)瓊脂為非選擇性計(jì)數(shù)培養(yǎng)基,需要高壓蒸汽滅菌殺死所有外源的孢子和芽孢,才能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)樣品中的菌落總數(shù)。結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂是檢測大腸菌群的,大腸菌群沒有孢子和芽孢,所以煮沸滅菌即可。
13.為什么菌落總數(shù)培養(yǎng)條件為36±1℃培養(yǎng)48±2h,而水產(chǎn)品要求30±1℃培養(yǎng)72±3h?
A:對于沒有經(jīng)過任何加工的水產(chǎn)品,其菌落總數(shù)培養(yǎng)條件為30±1℃培養(yǎng)72±3h。因?yàn)樗斜旧頊囟容^低,未加工的水產(chǎn)品中微生物主要來源于水體,30℃、72h是水中微生物最適培養(yǎng)溫度和時間。而加工水產(chǎn)品和其他產(chǎn)品培養(yǎng)條件都是36±1℃培養(yǎng)48±2h,其實(shí)就是產(chǎn)品本身的菌和加工過程中帶入的菌的最適培養(yǎng)溫度和時間不同的問題。
來源:小編根據(jù)食品論壇及微信好友討論匯總